中文摘要：

非酒精性肝炎（NASH）是近年来倍受关注的肝病之一，自由基损伤乃NASH发生的重要环节。本课题复制大鼠NASH模型，分离制备肝细胞，用H2O2模拟自由基损伤。给予重组肝刺激因子(HSS),通过检测膜流动性、脂质过氧化反应、细胞形态及DNA断裂等指标，观察HSS对NASH损伤肝细胞的保护作用。同时，建立HSS转染肝细胞，观察高表达HSS细胞对自由基损伤的敏感性。研究NASH过程中细胞凋亡的作用及HSS是否具有抗凋亡活性。利用定点突变技术，制备HSS半胱氨酸位点的系列突变体，导入肝细胞，观察不同位点突变的HSS所造成的细胞抗损伤作用差异，推测HSS参与抗氧化还原反应的可能靶点。此外，拟采用碘乙酰胺巯基封闭技术，改变HSS分子结构，再通过表达重组HSS突变体，检查其活性，进一步探讨HSS蛋白参与抗氧化损伤的分子机制。通过上述研究，旨在充分阐述HSS治疗NASH的可能性，为其实际应用提供理论依据。

结论摘要：

采用高脂饮食复制大鼠非酒精性肝炎（NASH）模型，发现NASH与线粒体结构发生改变，随NASH延长，线粒体损伤愈重。同时，受损肝细胞中ATP的含量明显降低，而后者又与线粒体Redox受到损害密不可分。为此，我们以呼吸链解耦联蛋白2（UCP2）为靶点，观察NASH与UCP2表达的关系。结果表明，NASH肝脏中UCP2蛋白和mRNA水平明显增高。更进一步发现UCP2启动子上游-84～-60片段可能是调节UCP2表达关键靶点之一，因为NASH条件下正是该区域与Sp1特异性结合导致UCP2基因和蛋白质水平异常增加。已知自由基在NASH肝损伤中起重要作用，我们研究HSS对遭受自由基（H2O2）破坏的线粒体是否具有保护作用。证明，HSS 对H2O2 诱导的BEL7402 细胞凋亡产生明显的保护作用，其机理可能与其对线粒体的保护有关，HSS增加线粒体ATP 含量，降低线粒体膜通透性和减少细胞色素C 的释放。进一步又证明，采用鼠尾静脉注射HSS裸质粒，对D-GAL致暴发性肝损伤具有明显保护作用。最后，我们试图找出HSS活性部位所在。结果显示，突变HSS蛋白C端62-65（CXXC）可影响其抗氧化活性。