中文摘要：

开发功能性益生菌是食品微生物的重要研究方向，乳酸菌通过同化作用降胆固醇的功能逐渐受到人们的关注，但是益生性乳酸菌同化降胆固醇的分子作用机制尚不清楚，限制了菌株的开发及应用。本课题组已分离筛选到一株植物乳杆菌，该菌株可通过同化作用使得介质中胆固醇显著降低，并显著改变细胞不饱和脂肪酸含量，且菌株移除胆固醇效率受胆固醇胁迫程度的影响。本研究拟利用人工转座复合物随机插入植物乳杆菌基因组，构建转座子突变库；经表型筛选，获得同化降胆固醇功能显著改变的突变子；使用染色体步移技术，获得突变子基因组转座插入位点两侧的DNA序列，进而获得基因全序列，并进行生物信息学解析；构建基因敲除菌株并完成遗传互补实验，验证基因功能；明确胆固醇胁迫与关键基因转录响应事件的调控关系。项目工作将在整体上初步阐明益生性植物乳杆菌同化降胆固醇的分子作用机制。

结论摘要：

开发功能性益生菌是食品微生物的重要研究方向，乳酸菌通过同化作用降胆固醇的功能逐渐受到人们的关注，但是益生性乳酸菌同化降胆固醇的分子作用机制尚不清楚，限制了菌株的开发及应用。本课题的目标是利用Mμ转座插入诱变的方法，经电转化条件优化，对筛选到的降胆固醇能力显著的植物乳杆菌MA2，进行突变子库构建，探究胆固醇功能相关基因。研究结果表明，共获得238个突变株，其中三株突变株的胆固醇移除率58号33.53%，99号22.47%和163号32.30%，与野生菌植物乳杆菌MA2的60.30%相比，有显著改变。巢式PCR对58号突变株进行侧翼序列分离，得到Mμ转座子3’端约300bp的片段，经生物信息学比对，得到同源性比较高的序列，初步判定其插入位点基因为鼠李糖激酶编码基因。这为探究其5’端基因序列及另两个突变株转座侧翼序列以及其他降胆固醇功能基因提供了技术前提，并为探讨乳酸菌同化降胆固醇的分子机制奠定了一定的基础。