试验以CLA功能性青贮生物调控技术初步设想为基础,尝试将青贮中亚油酸氢化菌分离、鉴定出来,并初步研究其生物学特性;应用超声波生物破碎、阴离子交换层析和凝胶过滤等现代化工分离技术,尝试分离纯化出亚油酸异构酶,并研究其酶学分子特性;尝试利用N+注入育种工程技术,选育出"高产突变亚油酸氢化菌株",并通过RAPD技术和DNA序列测定技术来研究N+注入后亚油酸氢化菌自身及其异构酶的基因碱基突变规律;尝试将"高产突变亚油酸氢化菌"重新回接到青贮中,探讨不同pH、青贮原料、氮源、青贮时间和金属离子对"高产突变亚油酸氢化菌"CLA产量的影响,旨在摸清CLA高产乳酸菌的最佳发酵产酸条件,为今后通过青贮营养调控来提高乳酸菌CLA产量提供理论依据;将CLA功能性青贮投喂泌乳奶牛,探讨其对奶牛产奶性能和乳中CLA含量的影响,旨在摸清CLA功能性青贮的实际饲喂效果。
试验申报了2项国家发明专利,即一种乳酸菌发酵制备共轭亚油酸青贮的方法和一种乳酸菌发酵制备共轭亚油酸豆粕的方法;首次自玉米青贮中分离到一株产共轭亚油酸(CLA)细菌,其CLA最大产量为33.442 ug/ml,分子生物学鉴定结果表明该菌株与Lactobacillus plantarum strain L5的16S rRNA碱基序列相似性达99.93%(序列已上传GenBank,登陆号为EF185922),确定其为植物乳杆菌,并被命名为ANCLA01;经离子注入诱变选育,ANCLA01乳酸菌CLA产量大幅度提高;接种ANCLA01乳酸菌后4种青贮和豆粕中CLA含量均明显增加(P<0.05或P<0.01);随着乳酸菌接种量的增加和油脂添加量的加大,青贮和豆粕中CLA含量呈现增加后减少的趋势,对于不同青贮原料来说,接种乳酸菌后甘薯和白萝卜青贮中CLA含量明显高于胡萝卜和土豆(P<0.05);当葵花籽油添加量达到9-12mg/g时,青贮中CLA含量最高;当乳酸菌接种量为当乳酸菌接种量超过8×107cfu/g时,青贮中CLA含量开始明显下降(P<0.05)。