恒定链(Ii)是MHCⅡ类分子伴侣蛋白,在MHCⅡ分子表达和组装,特别是呈递外源性抗原肽中起重要作用。研究发现Ii链通过影响新生动物IgG的Fc片段受体(FcRn)胞吞途径来调控IgG的运输和代谢。本课题拟在克隆猪Ii基因和猪FcRn分子α 、β2m基因基础上,通过大引物PCR法对Ii和FcRn进行突变,构建表达含不同荧光蛋白的Ii和FcRn及相应突变体融合基因真核表达载体,通过共转染COS-7细胞检测Ii与FcRn的活性基团及细胞定位。进一步制备鼠抗猪Ii单克隆抗体,构建FcRn分子稳定转染P815细胞株,利用免疫共沉淀研究FcRn分子与Ii链之间的相互关系及Ii链在FcRn分子与IgG结合中的作用和分子机理。通过对猪Ii链与FcRn分子在真核细胞中的定位及相互关系的研究,揭示猪Ii链在FcRn分子胞吞途径中调控IgG运输和代谢的作用机理,探索通过该途径提高仔猪对IgG利用及其抗病能力。
项目围绕猪Ii链与FcRn的相互关系,开展一系列研究研究发现猪Ii链能够与FcRn H链或FcRn-β2m复合体在细胞的内膜系统共聚合,在此过程中,Ii的CLIP区段发挥了关键的作用,同时猪Ii链具有引导截断FcRn进入细胞内膜系统的功能。在FcRn与IgG的结合实验中,能够检测到Ii分子的存在。通过对猪Ii链与FcRn分子在细胞中的定位及相互关系的研究,揭示了猪Ii链在FcRn分子胞吞途径中调控IgG运输和代谢的分子机理。