中文摘要：

由于离体条件下单宁缩合酶极不稳定，蛋白纯化没能成功，本项目调整了研究计划，研究单宁缩合酶反应上游的无色花色素还原酶（LAR）和花色素还原酶 （ANR)，筛选其互作蛋白，以期获得所需的目标酶。主要研究成果如下（1）制备了具有特异性强的LAR1、LAR2和ANR抗体，为蛋白水平的研究奠定了基础；（2）分析了原花色素含量差异较大的5个葡萄品种中LAR和ANR基因在转录和翻译水平的表达规律，发现在赤霞珠、品丽珠、美乐、马瑟兰和西拉的果皮中VvLAR1的表达量均明显低于VvLAR2，且在果实发育过程中变化极小；而VvLAR2 表达量在发育早期较高，转色后明显降低，不同品种该基因表达最高峰出现的时间不同；发育过程中品种之间VvANR 的表达规律相似，但表达量差异较大；（3）免疫组织定位分析表明这些酶在种子中含量最高，其次为果皮，果肉最低；在亚细胞水平上，这些酶定位于细胞壁和细胞质，发育中后期主要在液泡中；（4）成功构建了葡萄果实酵母双杂交平台，筛选并证实了一小分子热激蛋白与LAR1有互作关系，筛选到几个与ANR互作的阳性克隆；这些发现，为从蛋白水平上阐明原花色素的合成与调控提供了重要证据。