选用疏风宣肺,解表利咽和解表清里,宣肺止咳二种治法方药对流感病毒感染细胞和小鼠流感模型进行研究,探讨二种治法方药对流感的治疗作用机制。阐明这二种治法方药如何改善流感病毒的感染后果,转换宿主抗流感病毒应答的调节机制。实验采用实时定量PCR芯片技术和Western-blot检测等方法确定二种治法方药对流感病毒感染细胞后诱导细胞活化、炎症细胞趋化、聚集和激活,释放过量的炎症介质,以及宿主Th1、TH2的分化、T细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和自然杀伤细胞激活相关基因的表达特点,并证实其发挥重要作用的关键分子。同时采用染色质免疫共沉淀技术,确定二种治法方药对流感病毒感染诱导细胞活化和对流感病毒介导免疫病理损伤过程中发挥重要调节作用的关键分子,以及二种治法方药的特异性调控靶标和作用特点。为中医药在分子基因水平抗病毒研究开拓新的思路和方法,为该药的临床使用奠定坚实的理论基础。
influenza viral pneumonia in mice;formulas to disperse wind and diffuse the lung, or;H1N1 flu virus;gene chip;signal transduction pathways
体内外实验结果 1.确定了疏风宣肺和解表清里方药分别对流感病毒感染小鼠的死亡率具有明显的保护作用,对肺组织免疫病理损伤也有明显的改善作用。 2.确定了流感病毒感染小鼠肺组织细胞差异表达基因,并分析确认了流感病毒感染小鼠肺组织细胞模式识别受体Toll-like receptor signaling pathway,以及与炎症相关的信号转导通路,如NF-κB signaling pathway,Jak-STAT signaling pathway和MAPK signaling pathway的活化,引起炎性因子过表达,诱导肺组织细胞损伤的作用机制。然后分别给予疏风宣肺和解表清里方药后可抑制流感病毒感染小鼠肺组织细胞表达TLR3及PKR蛋白表达、最终作用于核转录因子,下调炎性细胞因子的产生,从而阻断免疫性炎症级联反应,减轻免疫病理损伤。同时通过增加抑炎因子IL-10等的分泌,提高Th1细胞的活性,以及促进CTL细胞、NK细胞和巨噬细胞对病毒的清除,提高血凝素抗体及神经氨酸酶抗体,从而发挥抗病毒作用。另外,实验结果显示,疏风宣肺方在体内治疗流感病毒性肺炎小鼠的作用优于解表清里方。与体外试验和临床双盲试验结果相符。发表SCA论文1篇,在国内核心期刊上公开发表论文13篇。另外,培养博士研究生2人,硕士研究生4人。