可溶性CD40(sCD40)分子可竞争性阻断CD40/CD40L共刺激通路,抑制T细胞活化。本研究采用基因工程技术构建携带鼠CD40胞外区及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合蛋白真核表达质粒pEGFP-N1/sCD40,转染原代培养的大鼠未成熟树突状细胞,使用流式细胞分选技术筛选获得sCD40-EGFP修饰DC,并观察其对同种T细胞活化,细胞因子分泌,抗原特异性CTL细胞毒效应,效应细胞
可溶性CD40分子可竞争性阻断CD40/CD40L共刺激通路,抑制T细胞活化。本研究采用基因工程技术构建携带鼠CD40胞外区及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合蛋白真核表达质粒pEGFP–N1/sCD40,脂质体介导转染DC2.4细胞株,筛选获得稳定表达融合蛋白的基因修饰DC。探讨基因修饰DC对体外培养的淋巴细胞增殖功能、特异性CTL细胞毒活性及其凋亡、T细胞表型及Th1和Th2 类细胞因子分泌等方面的影响,在体外模拟了树突状细胞受LPS刺激并与初始T细胞表面CD40L的作用过程,观察体外LPS刺激及CD40的配基化对sCD40基因修饰DC TLR4-MD2表达及IL-12分泌的影响,并初步研究了sCD40-EGFP修饰DC及其表达蛋白对实验动物免疫功能的影响。阐明了sCD40-EGFP基因修饰树突状细胞诱导特异性T细胞免疫耐受的作用及其机制。下一步研究中我们拟将sCD40-EGFP修饰DC应用于大鼠肝移植模型,观察其对肝移植急性排斥反应的治疗作用,为临床防治肝移植排斥反应提供新思路和理论依据。