按照研究计划,本课题已经完成以下三部分内容1.小鼠趋化因子受体-7(CCR7)基因重组腺病毒载体的构建及鉴定;2.小鼠未成熟树突状细胞的培养鉴定和CCR7基因重组腺病毒转染对未成熟树突状细胞(imDCs)的影响;3.CCR7基因转染小鼠未成熟树突状细胞对异基因皮肤移植免疫耐受的影响。本研究利用基因克隆技术成功构建小鼠CCR7重组腺病毒载体,病毒滴度高,感染效率可达70%。在相应细胞因子作用下,从小鼠骨髓细胞中成功培养出具有典型形态及表型的DCs。运用高速离心法将Ad-ccr7成功转染imDCs,Ad-CCR7转染后可明显增加imDCs中CCR7mRNA、蛋白水平的表达,IL-10可部分抑制imDCs朝成熟方向转化。趋化实验及MLR表明腺病毒转后imDCs具有高体外迁移和较低刺激T细胞增殖能力。动物实验结果显示供者源imDCs在转染Ad-ccr7后,其诱导免疫耐受的能力较转染前提高,加入IL-10更能够显著提高皮片存活的时间。这为进一步研究皮肤移植免疫耐受提供了新的方法。
英文主题词dendritic cells; immune tolerance; recombinant adenovirus; chemokine receptor-7; transfection