中文摘要：

NGX6为我室克隆的一个与鼻咽癌和结直肠癌密切相关的转移抑制性基因。研究发现，NGX6存在两个蛋白亚型。NGX6A蛋白亚型在鼻咽癌中表达下调，并能和Ezrin发生交互作用；将NGX6A转染至鼻咽癌细胞，NGX6A经过泛素-蛋白酶体途径迅速降解；Ezrin是ERM蛋白的一种，拥有一个FERM结构域。文献证实含有FERM结构域的蛋白显示了具有调控其相关蛋白泛素化的能力。因此我们提出Ezrin介导NGX6A通过泛素-蛋白酶体在鼻咽癌细胞中降解的假说。为了证实假说，我们采用免疫共沉淀、RNAi、细胞内过表达及缺失突变等方法研究了鼻咽癌中Ezrin介导的NGX6A的泛素化作用及其相互作用的关键结构域，初步阐明NGX6在鼻咽癌中泛素化的分子机制；同时对解释Ezrin作为E3泛素连接酶的活性和功能，提供了新的思路和的实验依据。

结论摘要：

NGX6为我室克隆的一个与鼻咽癌和结直肠癌密切相关的转移抑制性基因。NGX6基因前期功能研究结果表明NGX6在鼻咽癌活检组织和鼻咽癌上皮细胞株中表达下调甚至缺失，而在正常鼻咽组织中存在高表达；NGX6基因在结直肠癌中亦存在不同程度的表达下调，伴有淋巴结转移的结直肠癌样本中NGX6表达下调的比例（15/16）远高于无淋巴结转移的结直肠癌样本（25/34）（P<0.05）。利用高通量的组织芯片进行原位杂交实验发现，NGX6基因的表达在有转移的肿瘤组织下调更明显，且与临床分期相关。NGX6基因分别转染鼻咽癌和结肠癌细胞之后可使鼻咽癌和结肠癌细胞的恶性表型得到部分逆转；可通过Ras/Raf/MAPK途径负调控EGFR增殖信号通路；免疫共沉淀实验发现NGX6可与作为细胞运动和转移调节者的Ezrin发生交互作用。为了进一步探讨NGX6基因抑制肿瘤生长和转移的分子机制。在本课题中我们首先采用pET原核表达系统表达并纯化NGX6ΔTM2蛋白（第二跨膜区缺失）。将重组蛋白免疫新西兰兔，制备获得抗NGX6蛋白多克隆抗体。应用该抗体研究以及数据库比对发现，NGX6蛋白存在两个蛋白亚型A和B, 分别来自3个不同的转录本。Western Blot和免疫组织化学检测显示NGX6A普遍表达与多种组织和器官中。NGX6A在正常组织中的表达远高于NGX6B，是占主要地位的蛋白亚型。进一步研究发现新发现的NGX6A蛋白亚型在鼻咽癌中表达下调，并能和Ezrin发生交互作用；将NGX6A转染至鼻咽癌细胞，NGX6A经过蛋白酶体途径迅速降解。为了阐明NGX6A在鼻咽癌细胞中降解的具体分子机制，我们进行了反复多次试验，并申请了本课题。最初我们认为NGX6A是经过泛素-蛋白酶体途径降解；但是经过反复试验证实了NGX6A经过蛋白酶体途径迅速降解而不被泛素化。NGX6A在降解的过程中可能被标记了其它的分子而不是泛素分子。同时我们明确了Ezrin在NGX6A蛋白降解中起到了关键作用。NGX6A蛋白的228AA-269AA是其降解的关键部位。Ezrin的1-296氨基酸的N-ERMAD结构域是Ezrin 介导NGX6A 蛋白降解的关键结构域。综上所述，本研究基本按照研究计划进行，本着科学客观的原则，做出了一些小的调整。初步阐明NGX6A在鼻咽癌细胞中降解的分子机制，为鼻咽癌的分子病理学提供了新思路和实验证据