最近实验直接证实进化能通过染色体易位创造新物种。而水牛染色体易位形成不同的品种还涉及到核仁组织区变化。因此,本项目以杂交水牛胚胎核仁组织区多态性为研究体系,建立核仁组织区的siRNA调控模型,探讨RNA介导基因调节进化与水牛染色体易位介导核型进化二者的内在关系,对真核生物基因表达调控与物种形成规律具有重要意义。
研究卵母细胞发育与核仁基因表达关系对于揭示胚胎发育调控有着重要意义。本项目完成了(1)小鼠卵母细胞GV期的核质比,分离获得51枚GV期卵母细胞,计算出GV期卵母细胞的核质比为0.054±0.019。与其它物种同时相核质比在相同范围内,说明核质比趋于常数,提示核质比是卵母细胞发育成熟的重要指标。(2)分析小鼠单个GV期、MⅠ期卵母细胞中18S rRNA基因的RT-PCR,结果显示18S基因在小鼠单个GV期、MⅠ期卵母细胞中均有表达,且MⅠ期的表达明显强于GV期的表达,该结果提示18S基因表达与卵母细胞的成熟可能相关。(3)根据小鼠和水牛18S rRNA二级结构设计并且构建了pGPH1/GFP/Neo-sh 18S rRNA干扰表达质粒。(4)分别对小鼠和水牛胚胎发育进行了18S rRNA干扰实验,结果未显示明显干扰效果,可能非编码RNA干扰与编码RNA(mRNA)的干扰原理和载体设计存在差异,需要进一步探索。