中文摘要：

胆汁淤积性肝病是婴儿残疾或死亡的重要病种。申请者最近发现并报道ATP8B1缺陷是我国婴儿进行性肝内胆汁淤积的重要原因之一，发现7种新突变，包括一热点连锁突变。前期研究中还发现婴儿进行性肝内胆汁淤积的另一重要基因ABCB11的突变和/或单倍型与部分不明原因进行性及非进行性婴儿肝内胆汁淤积症有关，因此提出ATP8B1的不同突变和变异能引起从暂时性至进行性的不同程度的婴儿肝内胆汁淤积症。本课题拟在可疑进行性和非进行婴儿肝内胆汁淤积中行ATP8B1全部外显子及邻近序列测序，继续发现新突变，并在大样本非进行性婴儿肝内胆汁淤积和对照组中验证，从而阐明我国ATP8B1基因的突变和变异谱；使用生物信息学技术、Western Blot、免疫组化和基因转染等研究突变或变异对功能的影响，分析基因型和临床表型关系，阐明ATP8B1在非进行性婴儿肝内胆汁淤积症中的意义，为婴儿胆汁淤积的个性化诊断和治疗提供理论依据。

结论摘要：

ATP8B1表达于上皮细胞的顶膜，包括肝细胞的毛细胆管膜，介导磷脂酰丝氨酸由细胞膜外膜向内膜的内转位，其缺陷可导致胆汁淤积。ATP8B1的编码基因ATP8B1基因的不同突变和变异能引起从暂时性至进行性的不同程度的婴儿肝内胆汁淤积症。本课题在54例低GGT的进行性肝内胆汁淤积症病例中行ATP8B1基因全部编码外显子及邻近序列测序，发现18例存在ATP8B1基因突变，在未检测到突变的36例病例中检测了低GGT进行性婴儿肝内胆汁淤积症的另外一个重要致病基因，即胆盐外运泵的编码基因ABCB11，其中4例发现ABCB11致病突变。另外，我们对64例低GGT进行性婴儿肝内胆汁淤积症病例，生化提示ABCB11缺陷的患者中行ABCB11基因全部编码外显子及邻近序列测序，发现28例存在致病突变。通过对低GGT进行性肝内胆汁淤积症病例进行ATP8B1和/或ABCB11基因检测，发现9种ATP8B1基因新变异位点，24种ABCB11基因新变异位点。在收集168例非进行性婴儿肝内胆汁淤积症后，按病程中血清最高GGT水平进行排序，第30百分位GGT为 151.7U/L，第71位GGT为 290.1U/L，此后收集的非进行性婴儿肝内胆汁淤积症病例即以病程中最高水平GGT 151.7U/L和GGT 290.1U/L为临界值分别选入低GGT组、中GGT组 和高GGT组。低GGT组入选96例，高GGT组82例。对此178例患者行ATP8B1基因测序，共检测到34个变异位点，其中16个为新发现的变异。在低GGT组，发现1例由ATP8B1复合杂合突变引起，经统计分析，发现c.1430-42A>G变异可能与非进行性胆汁淤积患者血清GGT水平相关(P=0.001)。对于发现的ATP8B1基因变异，经功能预测影响剪切的17个变异位点采用Minigene system 验证其对转录的影响。在翻译水平上，构建ATP8B1转染细胞模型，检测变异对于ATP8B1蛋白表达的影响。此外，对于可获得肝组织标本的病例，采用免疫组化方法检测18例，其中7例存在 ABCB11表达缺失，其中4例为ABCB11基因突变纯合子，3例杂合子，4例提示存在ATP8B1缺失，其中2例ATP8B1基因突变纯合子。通过本研究，明确了我国婴儿肝内胆汁淤积症中ATP8B1基因突变的特征及变异对蛋白功能的影响，认识了ATP8B1缺陷的新表型。