中文摘要：

课题组在对Leydig细胞发育不良（LCH）家系的LHR剪切突变的功能研究中，发现了一种新的LHR剪切异构体（LHR-6A）。与以往的剪切异构体不同，LHR-6A为内含子6中的潜在剪切位点的激活，将159bp的内含子序列加入编码区中，形成含有209个氨基酸的截短蛋白质。这种蛋白质丧失了与配基125I－hCG的亲和力，但在正常人的卵巢和睾丸组织中表达很高。在3例LCH患者中发现"隐蔽外显子6A"的突变，致使其表达异常升高。从基因组的进化来看，这种新的剪切异构体为灵长类所特有。通过构建鼠－人嵌合的mLHR-6A质粒，转染小鼠睾丸间质细胞瘤细胞（mLTC-1）证实，LHR-6A的表达，可以调节hCG刺激后细胞内源性LHR的表达，提示这种新的剪切异构体可能参与下丘脑－垂体－性腺轴中激素的精细调控。进一步研究围绕LHR-6A是否参与对野生型受体的调控及其机制；并建立Knock-in动物模型探究其功能

结论摘要：

在对我国第一例Leydig细胞发育不良(LCH)家系进行的分子遗传学研究中，发现了黄体生成素受体基因（LHR）2种新的突变类型，除了5号外显子的错义突变I152T 外，还发现LHR基因6号内含子剪切位点的突变(IVS6-3 C>A)，造成外显子7缺失。在对LHR剪切突变的功能研究中，意外发现了新的LHR剪切异构体(LHR-6A)，为灵长类动物所特有。由于LHR 6号内含子中存在2个潜在剪切位点，可分别将159bp和207bp的内含子序列加入编码区中，形成长型及短型的剪切异构体; 但其中存在的终止密码，使其翻译产物均为含209个氨基酸的截短蛋白质。体外转染试验发现，此截断的蛋白质由于缺乏跨膜域和部分胞外域，不能定位于细胞膜上，也不能与125I-hCG结合。进一步生物信息学分析发现，在这段序列中存在3个高频的SNP，其中rs68073206位于内含子6A的剪切供位的+5’位，在正常人中，GG、TG 和 TT 基因型的频率分别为9.9 %, 49.4%,和40.7%。对32例不孕不育女性颗粒细胞的研究发现，GG基因型中，长型转录产物显著升高，与体外诱变和细胞转染的结果一致。不孕不育女性GG基因型的频率略高于正常人群，提示此SNP可能与不孕不育相关。对LHR病理性剪切异构体的功能研究发现，外显子7缺失的受体可以定位于细胞膜上；但共转试验发现，此剪切异构体对野生型受体无显性负效应，相关结果作为封面论文，发表在Molecular Human Reproduction上，还有论文在撰写中。此外，在基金的资助下，对7例17α-羟化酶突变患者中3种新的突变类型了详尽的临床和分子功能研究，共发表SCI论文3篇；对2例多发性内分泌腺瘤综合征家系进行了分子遗传学以及组织学研究，发表SCI论文1篇；对1例年轻的21羟化酶缺陷症伴发多器官功能衰竭患者进行了成功抢救，相关经验总结后发表SCI论文1篇；对11例5α-还原酶突变的患者的研究中，阐述了中国人5α-还原酶突变的临床和基因突变特点，已被Clinical Endocrinology修回。