中文摘要：

HPV感染导致宫颈癌发病的主要机制是它的两个癌蛋白E6、E7分别与抑癌基因p53、Rb结合。但并非所有的HPV感染都发生癌变，某种未知的生物因子可能在宫颈癌的发病方面起着重要作用。课题组前期研究表明microRNA-886-5p在宫颈癌组织中明显高表达，并且降调p53通路中凋亡相关蛋白Bax及p53等基因的表达，我们推测microRNA-886-5p是宫颈癌发生发展过程中一个重要的癌基因。本课题应用基因芯片和分子生物学技术研究microRNA-886-5p-p53通路异常对宫颈细胞恶性表型、细胞克隆形成及组织成瘤性的影响。探讨microRNA-886-5p是否可以作为早期宫颈病变检测的生物标记物。本研究将深化我们对microRNA-886-5p在宫颈癌发病的理解并探讨以此基因作为治疗靶标及早期诊断标志物的可能性，期望为宫颈癌的诊治提供新的思路。

结论摘要：

MiR-886-5p最初由高通量测序发现的一个非编码RNA。课题组前期研究表明miR-886-5p 在宫颈癌组织中高表达。近期有研究表明，miRNA886-5p并非经典的microRNA，而是一100多个bp的非编码RNA，故称为non-codingRNA886（nc886）。有研究显示其与穹窿体主蛋白（major vault protein，MVP）有潜在的关系,而后者是参与肿瘤化疗多药耐药的分子之一。本研究旨在进一步探索nc886与宫颈癌发生及化疗耐药的关系。本研究在宫颈癌SiHa细胞系中敲除nc886，观察MVP蛋白水平的变化，进一步验证了二者之间的关系；通过不同浓度紫杉醇处理宫颈癌SiHa细胞系，观察nc886与MVP对紫杉醇处理的反应；通过在子宫颈癌SiHa细胞系中敲减nc886后，在紫杉醇作用下，采用AnnexinV联合PI法检测细胞凋亡，MTT实验检测细胞增殖情况。为了进一步探讨nc886与宫颈癌发生及化疗耐药发生的机理，我们对nc886与P53及E2F1的相互作用进行研究。通过网站预测到nc886的启动子上游有E2F1的结合位点，通过过表达E2F1，观察nc886的变化情况；并构建含有nc886上游启动子全长、含有E2F1结合位点的删除体1和不含有E2F1结合位点的删除体2的质粒，采用luciferase试验与CHIP试验观察E2F1与nc886之间相互作用情况，应用FISH试验在正常宫颈及宫颈癌组织中对上述结果予以验证。结果显示在宫颈癌细胞系中敲除nc886后，MVP的蛋白水平表达下降；不同浓度紫杉醇处理宫颈癌SiHa细胞系后，发现nc886的RNA水平与MVP的蛋白水平随着药物浓度增加逐渐增高；紫杉醇处理敲除nc886的SiHa细胞系后，可观察到紫杉醇抑制细胞增殖的作用增强，细胞凋亡率明显增加。过表达P53后，nc886表达下降，而过表达或敲减nc886后，P53表达未发生变化。过表达E2F1后，nc886的表达上调。荧光素酶报告基因试验和CHIP实验显示和验证E2F1通过结合于nc886的启动子区上调nc886的表达。综上所述，沉默ncRNA886能下调多药耐药蛋白MVP的表达，并且促进紫杉醇抑制宫颈癌SiHa细胞系增殖和诱导其凋亡的作用，表明ncRNA886与宫颈癌的化疗耐药相关，这种相关性是通过E2F1调控nc886介导MVP表达实现。