中文摘要：

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）是饲料中常见的真菌毒素之一，在2007年和2008年饲料的检测报告中，该毒素的污染率分别高达95.9%和83.1%，严重影响了饲料的安全和动物的健康。在申请者以前的研究中，从土壤中分离到一株具有降解DON活性的真菌（NJA-1），经鉴定为塔宾曲霉（DQ9025790）。该菌在体外对DON的生物转化率高达94.4%。通过对降解产物的研究表明，该菌中的某些物质具有水解DON的作用，初步确定为环氧化物水解酶。本研究通过基因定位的方法在NJA-1菌中找到含有环氧化物水解酶的基因片段或降解质粒，并对该片段或质粒进行克隆，在大肠杆菌质粒中进行表达；研究不同温度，时间、pH和金属离子对酶活的影响；优化该酶的发酵条件；测定该酶对饲料中DON毒素的脱毒效果。对该酶的研究将对饲料中DON的生物脱毒提供一种新的解决途径。

结论摘要：

通过提取NJA-1菌中的总RNA，用RT-PCR的方法，获得了NJA-1菌中DON降解酶的基因片段，构建原核表达载体pET-EHse和酵母表达载体pPIC9K-EHsq。通过诱导，表达了可溶性的EH蛋白。IPTG诱导pET-EHse/BL21的最佳条件为IPTG终浓度为0.4 mol？L-1，25 ℃，培养16 h，EH的量可达2.3g？L-1菌液。EH的最适pH值为7.0，在pH 6.5～7.5范围内酶较稳定；最适反应温度为35 ℃，且在4 ℃～30 ℃范围内有较好的热稳定性；有机溶剂乙腈对酶活具有促进作用；Cu2+可以显著地促进酶活，可以作为该酶的激活剂，Mn2+也可促进酶活。EH产酶的最适培养基组成为葡萄糖 10 g？L-1；玉米浆15 g？L-1；KH2PO4 1 g？L-1 ；MgSO4.7H2O 0.5 g？L-1；KCl 0.5 g？L-1。通过体外降解试验证明EH对PBS 溶液中DON的降解效率为 73.42% ~91.83%。在饲料中添加10 mg？kg-1 采用壳聚糖和海藻酸钠包被的EH能明显减轻由5mg？kg-1 DON造成的对小鼠的危害，包括生长性能、胸腺和脾脏重量、、血常规、血清生化指标、组织器官病理的变化，与DON组比较差异显著（p <0.05），而与对照组相比较差异不显著（p >0.05）。