中文摘要：

全球正面临着新发传染病的重大威胁。隐孢子虫是近年来新发现且仅次于轮状病毒的主要肠道传染病，曾在美国等发达国家暴发流行。虽然该病在我国呈散发，但目前的检测方法已严重影响该病的诊断与防治工作，如不改进检测方法，提高防治效果，极可能造成爆发流行。本研究对隐孢子虫具有诊断价值的CP15、CP17、P20、P23功能蛋白基因进行克隆与表达。以重组蛋白或组合作抗原，通过酶联免疫吸附试验，检测隐孢子虫特异的IgG、IgM和IgA，筛选出最佳重组蛋白或蛋白组合。然后优化反应条件，在确立其敏感、特异、快速、简单的基础上进行现场实验，检测患者血清、粪便等样本中各特异性抗体，确定其在临床诊断和流调方面的价值，指导临床与防治工作。本研究首次将隐孢子虫具有病原学诊断意义的重组抗原联合用于隐孢子虫病检测，解决隐孢子虫抗原获取困难，纯度低的难题，并且检测方法操作简单，价格低廉，易于标准化，具有重要的社会和经济意义。

结论摘要：

本研究对隐孢子虫具有诊断价值的CP15、CP23功能蛋白基因进行克隆与表达。以联合重组蛋白做抗原，通过酶联免疫吸附试验，检测检测患者血清、滤纸血、粪便等样本中特异性抗体。结果显示重组表达质粒pET-30a-23和pET-30a-15/60-23高效表达CP23和CP15/60-23重组蛋白，且重组抗原均能刺激机体产生高滴度的IgG抗体，使脾细胞增生，CD4+、CD8+ T细胞百分数增加；体外都能刺激免疫后的脾细胞产生保护性细胞因子IFN-?和IL-12。联合重组抗原CP15/60-23-ELISA分别检测244例病人血清和滤纸血抗体，显示血清和滤纸浸出液的阳性率没有明显差异。联合重组抗原CP15/60-23 ELISA方法具有很高的敏感性，而且重组抗原制备简便，纯化后浓度很高，避免了纯化卵囊的复杂程序。本研究首次将具有诊断意义的联合重组抗原应用于隐孢子虫病检测，解决隐孢子虫抗原获取困难，纯度低的难题，并且检测方法操作简单，价格低廉，易于标准化，因此该方法是一种值得推广的检测方法，具有重要的社会和经济意义。