隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。本项目以C.andersoni为研究材料,克隆线粒体基因组并用Gene Construction Kit 25拼接序列;用Clustal X软件与疟原虫线粒体基因组相比较;用MacVector4.1.4软件分析蛋白质编码基因;用Clustal X推导氨基酸序列,并与报道的寄生性原虫如疟原虫、泰勒虫等相比较。用tRNAscan软件鉴定出trn基因。选取不同的基因或DNA片段构建隐孢子虫种内、种间及与其它亲缘种的种系发育进化树,评价其在隐孢子虫系统发生中的地位,克隆18SrRNA基因和70kDa热休克蛋白编码基因构建进化树作为线粒体基因构建进化树的参照。通过本项目的研究可建立隐孢子虫种类鉴定和基因型分析的新技术,为隐孢子虫分子流行病学的研究奠定基础。此外,线粒体是药物作用的靶器官,分析编码蛋白基因为今后药物研制提供新思路。
国内养殖鸵鸟鉴定出贝氏隐孢子虫以及鉴定出猪源猪隐孢子虫和鹌鹑源火鸡隐孢子虫。对骆驼和水貂隐孢子虫分离株进行分子特征分析,鉴别出C.anderson和隐孢子虫新基因型-水貂基因型。在国内首次对人源隐孢子虫进行分子鉴定,鉴定出C.hominis虫种。扩增并测序分析隐孢子虫线粒体功能性蛋白基因Cpn60,AOX,PNO,对隐孢子虫分离株进行扩增测序,以确定在动物源隐孢子虫线粒体相关基因是否存在,对扩增出的序列进行比对分析构建进化树,以确定不同隐孢子虫之间的进化关系,并与18SrRNA基因和HSP70基因构建的进化树作对照,结果表明通过Cpn60、AOX和PNO基因编码序列构建进化树也同样适于作为隐孢子虫种系发育分析。经过遗传特征分析证明河南人源隐孢子虫分离株为小球隐孢子虫鼠基因型和C.hominis;河南鹿源隐孢子虫分离株不同与小球隐孢子虫鹿基因型;河南猪源隐孢子虫的两个分离株均为小球隐孢子虫猪基因型,即猪隐孢子虫;河南鹌鹑源的隐孢子虫两个分离株分别为贝氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫;河南乌鸡隐孢子虫和鸵鸟隐孢子虫分离株均为贝氏隐孢子虫;河南牛源隐孢子虫分离株为安氏隐孢子虫。