艾灸治疗类风湿性关节炎(RA)具有疗效肯定和无毒副作用的独特优势。在艾灸治疗RA的效应与机理研究取得重要进展的基础上,本研究把握艾灸的温热刺激特性,依据"艾灸抗炎效应明确,不同灸法具有不同的温热刺激模式,热休克蛋白70(HSP70)与热刺激和炎症控制均有密切关系"的基本事实,提出"不同灸法诱导RA模型HSP70的不同表达是其抗炎效应差异的重要生物学基础"的研究假说。以针灸理论为指导,分别直接灸、隔物灸、温和灸家兔"肾俞"、"足三里"治疗实验性RA,观察其抗炎效应差异;围绕滑膜炎症关键病理环节,选择HSP70作为研究切入点,以"艾灸温热刺激-HSP70表达与调控-抗炎效应"为研究主线,运用神经化学阻断、RNA 干扰、免疫组化、Western-blot、流式细胞检测等方法技术,探索不同灸法诱导RA模型HSP70表达及其抗炎机制,对于深化艾灸治疗RA的原理研究、丰富灸法的科学内涵具有重要的价值。
moxibustion;RA model;anti-inflammation;HSP70;Signaling pathway
本课题以中医针灸理论为指导,以抗炎效应为目标、HSP70为研究切入点、以“不同灸法—HSP70表达与调控—抗炎效应”为研究主线,比较观察不同灸法(直接灸、隔姜灸、温和灸)对实验性RA模型的抗炎效应差异;运用神经化学阻断、RNA 干扰、免疫组化、Western-blot、流式细胞检测等方法技术,研究不同灸法对实验性RA模型HSP70表达、滑膜细胞分泌功能与增殖分化、滑膜细胞NF-κB信号通路的影响,探索不同灸法治疗RA的抗炎作用及其HSP70分子调控机制,深化艾灸治疗RA的原理研究,为临床运用灸法治疗RA提供更丰富的科学依据。研究结论1、不同灸法均具有明确的抗炎效应,但以隔姜灸作用最为明显,而运用工具药槲皮素可以取消不同灸法之间的抗炎效应差异;2、不同灸法均可诱导RA模型动物滑膜组织和滑膜液HSP70大量表达,运用槲皮素可在一定程度上抑制HSP70表达,提示HSP70可能在不同灸法的抗炎效应中发挥重要作用; 3、虽然槲皮素可以取消隔姜灸与温和灸、直接灸的抗炎效应差异,但并不能完全取消这三种灸法的抗炎效应,提示隔姜灸突出的抗炎效应可能与HSP70关系更为密切,但灸法的抗炎效应并不完全依赖于HSP70机制来实现; 4、不同灸法均能明显抑制RA模型动物滑膜细胞分泌相关炎症细胞因子的功能,但以隔姜灸作用最为明显;5、不同灸法均能明显抑制RA模型动物滑膜细胞NF-κB信号通路相关分子表达,但以隔姜灸作用最为明显;6、艾灸治疗可改善病理性炎性滑膜成纤维细胞生长状态,并具有促进其向正常化转归的作用。