中文摘要：

恩夫韦肽(T-20)是迄今为止FDA批准上市的唯一一种HIV膜融合抑制剂，可用于治疗高效抗逆转录病毒疗法治疗失败的病人。然而，T-20也可快速诱导耐药株的产生,研究新一代HIV融合抑制剂尤其是对T-20耐药株有效的抑制剂成为当务之急。本实验室完成了我国自主研发的第三代HIV膜融合抑制剂西夫韦肽的临床前药效学评价，研究结果表明西夫韦肽体外抗HIV-1活性好于T-20，体内半衰期也长于T-20。目前西夫韦肽已处于IIb期临床试验。本项目研究旨在利用体外诱导耐药株和体内耐药突变位点分析的方法，研究西夫韦肽耐药性的产生及机制。通过突变位点基因型和表型耐药的分析，评估西夫韦肽诱导HIV-1耐药的可能性及与T-20耐药突变的异同；分析不同HIV-1亚型对西夫韦肽与T-20耐药机制的异同，预测西夫韦肽与T-20产生交叉耐药的可能性，为将来西夫韦肽的临床应用奠定理论研究基础。

结论摘要：

本项目完成了预期目标和指标，因为样本、时间和经费的原因，原计划的小部分内容没有进行，但扩展了原计划主要研究内容，增加了时间动态观察HIV病毒耐药变化的内容，使得结果更有意义。阐明了西夫韦肽与T-20在不同亚型HIV中具有不同的突变方式，两个药物有交叉耐药的可能，但耐药机制又有不同，为今后西夫韦肽临床研究提供了参考。至今发表标注项目号的论文10篇，SCI论文7篇（含接受1篇），核心期刊论文3篇（含接受1篇），另有一篇SCI论文修回，1篇论文正在整理中。具体完成内容如下1）完成HIV-1 B亚型西夫韦肽和T-20耐药相关8个新突变位点的回复突变，复制动力学研究和表型鉴定，西夫韦肽和T-20的耐药株中均检测到L34F的突变，说明西夫韦肽与T-20存在交叉耐药可能，但L34F突变株复制能力较弱，可能不是主要突变。2）完成中国流行株HIV-1km018和HIV-1lf-1体外西夫韦肽和T-20耐药株的体外诱导和西夫韦肽和T-20相关耐药的分析和研究，按计划内容仅检测突变诱导终点的耐药情况不能了解耐药性的动态变化过程，我们增加了按时间顺序和诱导浓度收集不同时间点的病毒上清以研究诱导时间内病毒突变的动态变化。结果发现T-20的突变频率呈现明显随时间和浓度升高的趋势, 而有意思的是西夫韦肽并没有这一特性,突变虽然出现较T-20晚,但始终保持高突变频率。说明西夫韦肽与T-20的耐药机制有所不同。3）西夫韦肽诱导的HIV-1km018突变位点和HIV-1lf-1与HIV-1IIIB完全不同，Q32L, L34M和S35P均没有出现，仅出现Q66R的高频突变，提示Q66R可能为西夫韦肽的主要耐药位点。T-20耐药相关突变位点与已报道位点相同，未发现新的突变，但我们发现另一有趣现象，在HIV-1km018中T-20诱导突变以V38A/M为主要突变，而在HIV-1lf-1中T-20诱导突变以D36S为主要突变，提示在不同亚型病毒中，同一药物压力下，病毒可能采取不同的耐药突变策略。4）本项目中期试图采用454深度测序的方式对实验株HIV-1IIIB的耐药性进行研究，每个样品2000条序列，结果仅测到突变L34F，未发现其他罕见突变，表明采用454测序研究耐药突变时，需增加数据量，虽然因为时间和经费原因没有继续，但为其他将采用454测序方法进行类似研究的工作提供参考。