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棉花黄萎菌T-DNA插入突变体库的构建及致病相关基因的克隆
  • 项目名称:棉花黄萎菌T-DNA插入突变体库的构建及致病相关基因的克隆
  • 项目类别:青年科学基金项目
  • 批准号:30700520
  • 申请代码:C140102
  • 项目来源:国家自然科学基金
  • 研究期限:2008-01-01-2010-12-31
  • 项目负责人:汪敏
  • 负责人职称:副教授
  • 依托单位:河南农业大学
  • 批准年度:2007
中文摘要:

目前棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)致病分子机理的研究尚不清楚。本研究建立高效的农杆菌介导转化(Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation, ATMT)黄萎病菌体系,在农杆菌与黄萎菌共培养时间为48 h,农杆菌黄萎菌浓度比例为2501时,AS浓度400μΜ,承载介质为NC膜,黄萎病菌的转化率高达200-600 个转化子/106个孢子,并构建了8500个黄萎病菌T-DNA插入转化体库。通过致病力测定和表型筛选,获得6个致病力显著降低的突变体,14个微菌核减弱或丧失的黄萎病菌突变体,12个菌落生长缓慢突变体,4个菌落生长迅速突变体,5个产孢能力减弱的突变体,3个产孢能力增强的突变体。Southern杂交分析6个突变体的T-DNA插入拷贝数。利用TAIL-PCR已获得3个T-DNA插入突变体的侧端序列,正在进行测序。高效的农杆菌介导转化黄萎病菌(ATMT)体系建立和黄萎病菌T-DNA插入突变体库的构建,为棉花黄萎病菌功能基因组学及其致病基因的研究奠定了基础。

结论摘要:

英文主题词Verticillium dahliae; Insertional mutagenesis; Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation;Pathogenicity gene


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