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二氢生物喋呤还原酶参与调控HEK293T细胞自噬作用的初步研究
  • ISSN号:1671-7856
  • 期刊名称:中国比较医学杂志
  • 时间:2012.11.30
  • 页码:1-5
  • 分类:R332[医药卫生—人体生理学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]北京协和医学院,北京100021, [2]卫生部中日友好医院临床医学研究所,北京100029
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(81173422);国家自然科学基金资助项目(30973911).
  • 相关项目:糖肾方通过sEH/EETs调节NF-κB炎症通路治疗糖尿病肾病机制研究
中文摘要:

目的探讨二氢生物喋呤还原酶(dihydropteridine reductase,QDPR)对HEK293T细胞自噬作用的影响。方法构建野生型QDPR和突变型QDPR重组质粒分别转染HEK293T细胞,并设空载体对照组。采用RT-PCR及Western blot方法检测空载体组,野生型QDPR组和突变型QDPR组自噬相关蛋白LC3和Beclin 1的表达量变化。结果 1)测序结果证实PCR扩增得到编码正常QDPR的cDNA序列正确以及突变的cDNA也在正确的位置突变;2)磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,野生型QDPR和突变型QDPR融合蛋白成功表达;3)RT-PCR结果显示,与对照组相比,野生型QDPR组LC3基因水平明显上调(P〈0.05),突变型QDPR组LC3基因水平与对照组相比无统计学差异;与对照组相比,野生型和突变型组Beclin1基因水平无统计学差异;4)Western blot结果显示,与对照组相比,野生型QDPR组LC3-II和Beclin1的蛋白表达量明显上调(P〈0.05),但LC3-I的蛋白表达量无统计学差异,突变型QDPR组与对照组相比LC3-I,II和Beclin1的蛋白表达量均没有统计学差异(P〉0.05)。结论二氢生物喋呤还原酶能增强HEK293T细胞自噬相关基因LC3和Beclin 1的表达,提示其可能具有激活自噬作用的功能;二氢生物喋呤还原酶93位氨基酸的突变影响了其对细胞自噬作用的调控,降低了自噬标志分子LC3-I和Beclin1的基因表达。

英文摘要:

Objective To investigate the effects of QDPR on regulating the autophagy of HEK293T cells. Methods HEK293T cells were transiently transfected with recombinant plasmid DNA rQDPRwt and recombinant plasmid DNA rQDPRmut by calcium phosphate. After 72 h, the expression of rat QDPR in 293T cells was detected by Western Blot. Then, the effects of QDPR on autophagy related gene (including LC3 and Beclinl ) were analyzed by RT-PCR, and Western blot was used to monitor the changes in autophagy associated protein level. Results 1) The recombinant plasmid DNA rQDPRwt and recombinant plasmid DNA rQDPRmut were successfully constructed. 2)The fusion protein can express in HEK293T cell. 3) Compared with control vector group, the mRNA expression of LC3 was significantly up-regulated in rQDPRwt group ( P 〈 O. 05) , and the mRNA expression of Beclinl showed no significant difference among the 3 groups ( P 〉 0.05 ) ; 4) The Western blot analysis revealed that LC3-1I and Beclinl increased in rQDPRwt group when compared with control group, and there were no difference of protein levels among the 3 groups. The protein expression of LC3-I,II and Beclinl showed no significant difference between rQDPRmut group and control group. Conclusion QDPR may activate the autophagy of HEK293T cells by increasing the expression of autophagy associated genes of HEK293T ceils.

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期刊信息
  • 《中国比较医学杂志》
  • 北大核心期刊(2014版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国实验动物学会 中国医学科学院医学实验动物研究所
  • 主编:秦川
  • 地址:北京市朝阳区潘家园南里5号
  • 邮编:100021
  • 邮箱:b67761337@126.com
  • 电话:010-67779337
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-7856
  • 国内统一刊号:ISSN:11-4822/R
  • 邮发代号:82-917
  • 获奖情况:
  • 中国科技论文统计源期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:7696