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基于M基因的新城疫病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对临床样品中新城疫病毒检测的研究
  • ISSN号:0366-6964
  • 期刊名称:畜牧兽医学报
  • 时间:0
  • 页码:1120-1125
  • 语言:中文
  • 分类:S852.659.5[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]扬州大学兽医学院,扬州225009
  • 相关基金:国家自然科学基金重点项目(30630048);国家科技支撑计划(2006BAD06A03)
  • 相关项目:新城疫病毒跨种间感染与传播机制研究
中文摘要:

根据新城疫病毒M基因的保守序列,设计合成1对引物和TaqMan探针,以作者实验室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株M基因阳性重组质粒为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,结合ABI公司的7300型荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测新城疫病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在106~101拷贝范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中3拷贝.μL-1的病毒核酸,与传统的病毒分离方法具有相近的敏感性,二者对500份临床禽泄殖腔棉拭样品检测结果阳性数?阴性数符合率分别为90.0%、99.8%。经临床应用表明:荧光定量PCR的建立为早期诊断禽新城疫病毒、定量分析禽新城疫病毒感染程度奠定了基础。

英文摘要:

Pair of primers and a TaqMan probe were synthesized according to M gene conservative sequence of Newcastle disease virus. The positive recombinant plasmid containing M gene of NDV ZJ1 strain isolated from goose was used as a positive quantitative template to establish a standard curve. And then a real-time fluorescent quantitative RT-PCR assay was established. The method has a good linear relationship within the 10^6 to 10^1copies, with which 3 copies ·uL^-1 of the virus nucleic acid can be detected in the initial template, and has similar sensitivity with traditional virus isolation methods. The conforming rate of positive sum and negative sum with traditional virus isolation method was 90.0% and 99.8% respectively in detecting 500 clinic cloacal swab samples. The result showed that the constructed method paved the way for the early and rapid detection of NDV as well as quantitative analysis for the infection degree of NDV.

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期刊信息
  • 《畜牧兽医学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国畜牧兽医学会
  • 主编:文杰
  • 地址:北京海淀区圆明园西路2号中国农科院畜牧所
  • 邮编:100193
  • 邮箱:xmsyxb@263.net
  • 电话:010-62815987 62816996
  • 国际标准刊号:ISSN:0366-6964
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1985/S
  • 邮发代号:82-453
  • 获奖情况:
  • 1992年北京优秀期刊奖,1998年、2000年在全国畜牧兽医优秀期刊评比中获一等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),瑞典开放获取期刊指南,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:21857