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兔出血症病毒感染性cDNA真核表达载体的构建与鉴定
  • ISSN号:1671-9387
  • 期刊名称:《西北农林科技大学学报:自然科学版》
  • 时间:0
  • 分类:S858.291[农业科学—临床兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医] S852.659.6[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100, [2]浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所,浙江杭州310021, [3]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(30800045,30670074,30870114);浙江省自然科学基金项目“家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金”(Y305047)
中文摘要:

【目的】构建操作更简便的兔出血症病毒(RHDV)感染性cDNA真核表达载体。【方法】在前期构建的RHDV感染性克隆基础上,将其全长cDNA分子分为3段,利用单一的限制性内切酶将其依次克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建RHDV感染性cDNA真核表达质粒,将该质粒转染BHK-21细胞,传3代后,对产生明显细胞病变的细胞冻融液进行RT-PCR检测。【结果】RHDV感染性cDNA真核表达载体构建成功。构建质粒转染的BHK-21细胞出现明显细胞病变,RT-PCR检测结果表明,RHDV拯救成功。【结论】利用真核表达载体可以很方便地拯救出RHDV。

英文摘要:

[Objective] The study was done to construct a research platform which is easy to operate the infectious clone of rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV). [Methodl On the basis of pre-built infectious clone of RHDV,the full-length cDNA was divided into three fragments using the restriction endonuclease. The three fragments were ligated to the pcDNA3.1(+) plasmid in proper order in order to construct the eukaryotic vector of the infectious clone of RHDV. Then, the plasmid was transcripted into BHK-21 cells,the virus was collected and passed on for three generations. Next, the transfected BHK-21 cells which had the significant CPE were detected by RT-PCR. [Result] The new vector was successfully constructed. The significant CPE of transfected BHK-21 cells and RT-PCR amplification indicated that the cDNA clones were rescued successfully in BHK-21 cells. [Conclusion] The pcDNA3.1 (+) eukaryotic expression vector can rescue the infectious RHDV easily.

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期刊信息
  • 《西北农林科技大学学报:自然科学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:教育部
  • 主办单位:西北农林科技大学
  • 主编:山仑
  • 地址:陕西杨陵西北农林科技大学西农校区40信箱
  • 邮编:712100
  • 邮箱:xb2511@yahoo.com.cn
  • 电话:029-87092511
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-9387
  • 国内统一刊号:ISSN:61-1390/S
  • 邮发代号:52-82
  • 获奖情况:
  • 中国期刊方阵“双效”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,英国农业与生物科学研究中心文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:32360