中文摘要：

化疗已成为视网膜母细胞瘤治疗的重要手段，其药物作用敏感性是影响治疗效果的瓶颈。前期工作（NSFC面上项目，No.30772377）已证实PAX6过量表达促进了RB形成，其发生机制与细胞周期调控有关。是否可调控PAX6表达水平影响RB细胞周期状态，使更多肿瘤细胞进入对细胞周期特异性化疗药物（CCSA）敏感的S期或M期，从而提高治疗敏感性？前期实验证实抑制PAX6表达后，由MTT法检测发现RB细胞生长抑制率增加。据此我们假设PAX6的异常表达与RB对CCSA作用敏感性有关，并通过对细胞周期的调控参与了这一过程。本项目拟收集新鲜RB组织，进行原代培养，利用DNA重组技术调控PAX6在RB中的表达水平，检测CCSA作用敏感性和细胞周期，并结合动物实验及分子机制研究，共同验证PAX6对 CCSA作用敏感性的影响及可能调控机制。为今后探索新的RB化疗药物、联合用药方案及治疗模式奠定一定的理论基础。

结论摘要：

背景化疗已成为治疗视网膜母细胞瘤的重要手段，化疗药物作用敏感性是影响治疗效果的瓶颈。前期实验研究证实，抑制PAX6表达后RB细胞增殖抑制率增加，其发生机制与细胞周期调控有关。是否可通过调控PAX6表达水平影响RB细胞周期状态，使更多肿瘤细胞进入对细胞周期特异性化疗药物（CCSA）敏感的S期或M期，从而提高治疗敏感性？主要研究内容收集新鲜RB组织，进行原代细胞培养，通过构建慢病毒载体调控PAX6在RB细胞中的表达水平，检测CCSA作用敏感性和细胞周期，并结合动物实验及分子机制研究，验证PAX6对CCSA作用敏感性的影响及其可能调控机制。重要结果及关键数据 1. 长春新碱作用于RB细胞的半数抑制浓度为0.02789μg/ml，依托泊苷为0.4647μg/ml。 2. PAX6过表达组（OE）细胞内PAX6 mRNA相对表达量较对照组明显上升，PAX6抑制组(KD)较对照组明显下降（P<0.001）。 3. OE组较其他组细胞增殖速度快，以Y79细胞为著。加入长春新碱后各组细胞增殖速度减慢，以OE组为著（P<0.05）。 4. 加入长春新碱后，Y79细胞OE组、KD组和CON组的细胞凋亡率较前显著增加，以OE组为著（P<0.05）。 5. 加入长春新碱后，OE组G0/G1期细胞比率较前显著上升，S期和G2/M期细胞比率较前显著下降（P<0.05）。 6. PAX6过表达使RB细胞对长春新碱的敏感性增加，其机制可能与PAX6基因促进肿瘤细胞进入细胞增殖期有关。科学意义探寻提高现有RB化疗药物作用敏感性的方法，为今后探索新的治疗方案奠定一定的理论基础。