Parkin介导的底物泛素化在帕金森病发病机制中的作用研究-东篱科研大数据发现系统（DRDS）

位置：立项数据库 > 立项详情页

Parkin介导的底物泛素化在帕金森病发病机制中的作用研究

项目名称：Parkin介导的底物泛素化在帕金森病发病机制中的作用研究
项目类别：面上项目
批准号：30370515
申请代码：H0912
项目来源：国家自然科学基金
研究期限：2004-01-01-2006-12-31

项目负责人：唐北沙
负责人职称：教授
依托单位：中南大学
批准年度：2003

中文摘要：

α－酮戊二酸载体蛋白是我们利用酵母双杂交技术分离的帕金森病致病基因parkin的相互作用蛋白，本课题拟进一步以全长的、截短的parkin基因编码区序列和α－酮戊二酸载体基因编码区序列构建表达质粒，转染SH-SY5Y细胞，采用免疫共沉淀技术鉴定parkin蛋白与α－酮戊二酸载体蛋白的相互作用结构域；采用体外泛素化检测技术和脉冲追踪试验鉴定α－酮戊二酸载体蛋白是否为parkin蛋白的底物蛋白。探索pa

中文主题词： Parkin；OGCP；相互作用

英文摘要：

Parkin；OGCP；interaction

英文主题词： Parkin；OGCP；interaction

结论摘要：

本课题在前期工作的基础上，进一步研究Parkin与OGCP之间的相互作用。成功构建了pCMV-Parkin和pcDNA3.1-myc-OGCP真核表达质粒，建立了Parkin-Flag稳定表达的HEK293细胞；免疫荧光和激光共聚焦显微镜共定位技术发现Parkin和OGCP存在共定位，免疫共沉淀实验证实Parkin和OGCP存在相互作用，且相互作用结构域在Parkin的第220-465位氨基酸区域内；流式细胞技术发现OGCP的过度表达能促使HEK293细胞的凋亡,而parkin能减少OGCP过度表达对HEK293细胞的影响；体外泛素化实验和体内泛素化实验均证实Parkin能介导OGCP的泛素化；应用特异的蛋白酶体抑制剂和蛋白酶抑制剂对OGCP-myc稳定表达的HEK293细胞进行干预，发现均能减缓OGCP的代谢和更新，提示蛋白酶体途径和溶酶体途径都参与了OGCP的代谢；通过同位素35S标记的脉冲追踪实验发现OGCP的代谢半衰期约为8-10小时，Parkin能促进OGCP蛋白的代谢和更新；应用DHPLC对120例PD患者进行OGCP的SNP分析，没有发现与PD发病相关的SNP改变。

成果综合统计