中文摘要：

肝纤维化是各慢性肝病最终发展成肝硬化的必经病理过程，肝星状细胞的激活被认为是肝纤维化发生的始动环节，研究认为其活化是一个涉及多细胞因子、细胞信号通路间共同调控的过程，具体发病机理尚不清楚。新近研究证实Wnt/β-catenin通路在肝发育及肝脏相关疾病中异常活化。虽然在肿瘤发生机理中，Wnt抑制剂Wif-1和Dkk-3基因启动子受表观遗传学甲基化修饰致低表达是Wnt通路活化的重要机制，但Wif-1和Dkk-3在肝纤维化发生发展中的作用及机制并未阐明。本课题拟通过RNA干扰及去甲基化方法，确定肝星状细胞Wif-1和Dkk-3基因启动子活性受DNA甲基化调控，揭示Wif-1和Dkk-3基因启动子甲基化致Wnt通路异常活化的分子机制；同时阐明Wif-1和Dkk-3基因表达和CpG岛甲基化率的改变对肝纤维化严重度的影响，明确Wnt通路参与肝纤维化发生发展过程，为肝纤维化诊治提供新的靶点和理论依据。

结论摘要：

肝纤维化是各慢性肝病最终发展成肝硬化甚至肝癌的必经病理过程，肝星状细胞的激活被认为是肝纤维化发生的始动环节，具体发病机理尚不清楚。新近研究证实Wnt/β-catenin通路在肝发育及肝脏相关疾病中异常活化。但该机制在肝纤维化发生发展中的作用及机制并未阐明。本课题拟通过RNA干扰及去甲基化方法，设计体外细胞实验，确定肝星状细胞Wnt/β-catenin相关抑制剂Wif-1、Dkk-1、Dkk-3基因启动子活性受DNA甲基化调控，揭示这些基因启动子甲基化致Wnt通路异常活化的分子机制；同时设计体内实验，阐明Wif-1、Dkk-1、Dkk-3基因表达和CpG岛甲基化率的改变对肝纤维化严重度的影响，明确Wnt通路参与肝纤维化发生发展过程，为肝纤维化诊治提供新的靶点和理论依据。在课题进行中，考虑到肝纤维化/肝硬化与肝癌发生密切相关，以及实际取材的现实性，将体内试验中原来的两组（肝纤维化组和对照组）增设为三组正常对照组，肝纤维化/硬化组，肝癌组。根据课题现有结果，证实了① 在由肝纤维化/硬化发生，直至肝癌的一系列发展过程中，甲基化修饰Dkk-1和Dkk-3伴随mRNA水平下调，蛋白表达降低；而这一机制的因果关系在针对Wif-1基因的系列试验中未能明确。② 在上述过程中，细胞内Wnt/β-catenin信号转导通路异常激活与Dkk-1和Dkk-3基因DNA甲基化相关。③ 肝纤维化/硬化组织也存在经典Wnt信号通路的异常活化，相关病理进程可能与Wnt经典信号通路异常激活有关。以上过程在细胞实验层面基本得到了证实。课题结果中的部分内容已经以论著形式发表，并被SCI收录。