CD40-FasL融合蛋白阻断T细胞活化信号及诱导靶向凋亡的-东篱科研大数据发现系统（DRDS）

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CD40-FasL融合蛋白阻断T细胞活化信号及诱导靶向凋亡的

项目名称：CD40-FasL融合蛋白阻断T细胞活化信号及诱导靶向凋亡的
项目类别：面上项目
批准号：30371651
申请代码：H3104
项目来源：国家自然科学基金
研究期限：2004-01-01-2006-12-31

项目负责人：何贤辉
负责人职称：研究员
依托单位：暨南大学
批准年度：2003

中文摘要：

诱导特异性T细胞耐受是防治移植排斥和自身免疫病的理想方法。目前诱导移植耐受或重建自身免疫耐受包含五种实施方案，各有其优缺点。本项目旨在结合其中三中方案的优点，建立一种新型的免疫耐受诱导剂。CD154-CD40相互作用在调节CD4＋T细胞活化中起着非常关键的作用。FasL通过诱导T细胞凋亡是产生T细胞耐受的关键环节。我们克隆了CD40和FasL基因，并构建包含Flag标签和三聚化亮氨酸拉链序列在内的CD40-FasL融合蛋白表达质粒，以制备CD40-FasL融合蛋白单体和同三聚体。通过体外T细胞活化、接触性皮炎和鼠胎心肌移植等模型，评价CD40-FasL融合蛋白对CD154-CD40的阻断、体内负性调节细胞的诱导和CD40引导的活化T细胞靶向凋亡的作用，探讨把它发展成为特异性免疫耐受诱导剂的可能性。无论从机构与设施、人才与技术或任务与成绩等方面来衡量，项目组均能按计划完成课题。

中文主题词： CD40，FasL，融合蛋白，三聚化基序，免疫药理

英文摘要：

CD40, FasL, fusion protein, tr

英文主题词： CD40, FasL, fusion protein, tr

结论摘要：

CD40-CD154和FasL-Fas相互作用在调节T细胞活化和诱导活化T细胞凋亡过程中起关键作用，它们在生理状态下以三聚体的形式相互作用而传递信号，故以可溶性三聚化受体干预其信号通路有助于耐受形成。本课题首先在大肠杆菌中表达CD40单体、CD40与异亮氨酸拉链(IZ)融合的CD40IZ、FasL-IZ和CD40-IZ-FasL三聚化分子，然后评价其生物活性和免疫药理作用。通过基因工程方法构建上述重组蛋白的表达载体，并在大肠杆菌中获得表达，以免疫印迹鉴定表达产物。建立有效的包涵体复性方法和柱层析纯化方案，获得高纯度的可溶性重组蛋白。通过分子筛和非变性胶等方法分析，证明引入IZ基序到重组蛋白中，可促使重组蛋白在溶液中自发形成三聚化产物，并且三聚化产物的生物活性大大提高。小鼠模型实验显示三聚化分子较单体分子能更好地阻断T细胞介导的免疫应答，具有潜在的诱导免疫耐受的药理作用。本研究结果表明，通过引入IZ基序使可溶性重组蛋白自发形成三聚体，从而大大提高其生物活性和药理作用；这些结果为通过阻断CD40-CD154信号通路并通过Fas 诱导凋亡途径而抑制免疫应答并诱导耐受的临床研究奠定基础。

成果综合统计