中文摘要：

内源性NO合酶抑制剂非对称二甲基精氨酸ADMA在多种心血管疾病的发病机制中起重要作用，是包括心衰在内的心血管疾病新的风险因子和预后独立预测因子。DDAH1、DDAH2和AGTX2是介导人体ADMA代谢灭活的3个关键酶。本项目在前期小样本病例对照研究发现DDAH1和AGTX2多态性在心衰病例和对照人群中基因型分布存在差异的基础上，进一步研究3个基因的多态性对心衰易感性及预后的影响；通过构建真核表达载体、报告基因和EMSA实验，对阳性关联单核甘酸多态性（SNP）进行功能验证；并在不同基因型人脐静脉内皮细胞（HUVEC）研究阳性关联或功能性SNP对HUVEC血管新生能力的影响，查明三个基因的多态性影响心衰易感性及其预后可能的分子机制。本项目将全面系统地阐明ADMA代谢酶基因多态性与心衰易感性的关系和对心衰预后的影响及机制，从而有助于加深对心衰发病机制的认识，为全面提高心衰的防治水平奠定理论基础。

结论摘要：

通过病例对照研究查明非对称性二甲基精氨酸（ADMA）灭活代谢酶基因多态性与CHF遗传易感性的关系。 项目收集了CHF患者和健康对照标本分别1215例和 1327例，收集了冠心病患者血液标本 940例，结果发现CHF患者中AGXT2 rs37369 GG基因型频率显著高于对照组（18.9% vs 14.7%，P=0.009），校正心衰相关风险因素后，rs37369 GG基因型显著升高心衰的发病风险（OR=1.36，95% CI1.08-1.71，P=0.009）。通过对心衰患者有无伴发心衰和是否吸烟进行分层，发现rs37369 GG基因型显著升高无伴发冠心病心衰的发病风险（OR=1.49，95% CI1.07-2.08，P=0.018），而在不吸烟个体、吸烟个体和伴发冠心病的患者中，均有增加心衰易感性的趋势（不吸烟个体OR=1.32，95% CI1.00-1.74，P=0.051；吸烟个体OR=1.52，95% CI1.00-2.31，P=0.052；伴冠心病的心衰OR=1.30，95% CI0.99-1.69，P=0.055）。通过对心衰患者的预后情况进行随访，Kaplan-Meier生存曲线法分析结果发现，纽约心功能分级（NYHA）可显著影响CHF的预后，发病年龄、AGXT2 rs37369和DDAH1 rs233113多态性均有影响CHF患者预后的趋势。构建了的AGXT2 rs37369 位点野生型与突变型的真核表达载体，发现ADMA可以促进培养的脐静脉内皮细胞（HUVEC）迁移、抑制该内皮细胞小管形成能力，过表达野生型或突变型的AGXT2真核表达载体均可逆转ADMA的作用，并且转染AGXT2 rs37369-A质粒的HUVEC细胞裂解液ADMA的代谢活性显著高于转染rs37369-G质粒的细胞。发现miR-21介导4-羟基壬烯醛（4-HNE）对DDAH/ADMA系统的调控；发现DDAH1为miR-455-5p的靶基因，miR-455-5p可显著降低DDAH1三个转录本mRNA和蛋白表达，其对DDAH1的抑制作用受DDAH1 rs233112-rs233113单倍型的影响，对携带rs233113T-rs233112G单倍型质粒的报告基因活性抑制作用显著下降；发现炎症因子TNF-α可显著升高HUVEC细胞miR-455-5p mRNA表达。