基于稳定同位素标记、液相色谱、质谱及联用等的先进检测方法,体外模拟结肠酵解,以多糖基质持水性、酵解后醇不溶沉淀物持水率、潜在持水率和阳离子螯合力等指标作为酵解程度指标,考察果胶多糖的酯化度、糖醛酸含量、分子量等因素对果胶多糖的酵解程度、短链脂肪酸产量与比例、血脂水平与血浆胆固醇酯转运蛋白、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶活力、粪便量及粪脂含量的影响,探求果胶多糖及其增稠剂的降血脂构效关系;并藉二元C、H稳定性同位素多标记不同结构果胶多糖组分、犬结肠原位肠灌注法示踪其结肠酵解产生的乙酸是否进入肝脏,进而考察果胶多糖对体内血脂和乙酸代谢的影响,揭示果胶多糖结肠酵解后的去路,为果胶多糖、果胶类食品添加剂及中药多糖体内发挥功效作用提供支持和依据。
commercial pectin;short-chain fatty acids;Bifidobacterium bifidum;colonic fermentability;isotope-label
果胶多糖是存在于植物细胞壁中的一种天然高分子聚合物,由D-吡喃半乳糖醛酸通过?-1,4 糖苷键连接成主链,中性糖(包括D-半乳糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖等)组成侧链。市面上的果胶多糖(或典型果胶)主要有高甲氧基果胶甲氧基果胶、酰胺化果胶。目前对果胶多糖的研究主要侧重于分离纯化与结构的研究,结肠酵解性能的研究较少。本课题以苹果果胶、柑橘果胶、酰胺化果胶为基料,进行了理化性能与体外结肠性能的关系研究,主要研究结果如下采用对氨基苯甲酸衍生化高效液相色谱法等方法,分析了苹果果胶、柑橘果胶、酰胺化果胶的组成与理化特性,结果表明三种果胶主要有半乳糖、葡萄糖、鼠李糖和木糖构成,糖醛酸分别为18.1, 16.5, 3.19 Mol %,、表观平均分子量分别为410, 258, 6508 kDa、甲氧基取化度分别为0.6, 69.4, 26.4 %(乙酰取代度) 特性粘度分别为1196, 847, 8990 ml/g。选用两歧双歧杆菌(Bifidobacterium)为受试菌,三种果胶及低聚糖为碳源,考察其静态发酵性能,结果表明苹果果胶酯化度对两歧双歧杆菌发酵产气量有很大影响,酯化度?65%,发酵产气量与酯化度有良好线性关系;果胶低聚糖比未分解的果胶的双歧杆菌生长快,低酯化度的果胶低聚糖比高酯化度的双歧杆菌生长快。体外结肠酵解的结果表明苹果高甲氧果胶与低甲氧果胶底物消失速度最快,苹果果胶酸在酵解较慢,酰胺化果胶酵解最慢。探讨了2H或与13C标记的短链脂肪酸经二氟苯胺衍生化后气质联用选择离子监测方法,甲酸、乙酸、丙酸和丁酸检测线分别为0.4, 0.03, 0.01, 0.01 nmol,13C乙酸与乙酸的丰度比(M+1)/M和其乙酸摩尔百分比丰度有较好的线性关系(r=0.99)。此外,分离纯化得到WSP1、WSP2a和WSP3仙人掌粗多糖组分,其中WSP2组分能延长活化部分凝血酶原时间(APTT)和凝血酶时间(TT),而对凝血酶原时间(PT)的影响不显著,说明是通过影响内源性凝血系统而发挥抗凝血作用的。分离纯化得到TPS-1、TPS-2、TPS-3和WSP2a茶多糖组分,体外抗凝血实验显示TPS-4能延长活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT),说明是通过内源性途径来影响凝血的。WSP2a与WSP2a可开发为天然抗凝血活性物质。