中文摘要：

本项研究的主要内容是改进体细胞核移植技术中的去核方法、融合方法和体外培养方法，简化牛体细胞核移植程序，提高核移植效率，降低核移植成本，探索核移植技术推广和应用的可能性。牛的体细胞核移植，在核移植动物中占有十分重要的地位。通过体细胞核移植途径可以由少数优秀个体产生大量生物性状极为相似的奶牛或种公牛个体；准确控制出生个体的性别；批量生产乳腺生物反应器高效表达个体，是转基因动物扩大成果并进入商业运营的有效途径，也是迅速扩大育种成果的有效途径。

结论摘要：

本项研究的主要内容是改进体细胞核移植技术中的去核方法、融合方法和体外培养方法，简化牛体细胞核移植程序，提高核移植效率，降低核移植成本，探索核移植技术推广和应用的可能性。研究结果表明组织块培养法适宜于牛耳皮肤细胞的原代培养，M199﹑DMEM培养液均可用于牛皮肤细胞的原代和传代培养；在首先去除透明带且对卵母细胞用细胞松弛素B进行预处理后，微针切割的方法可以用于成熟卵母细胞的去核；无透明带的克隆胚可通过改进的培养方法解决胚胎之间聚集的问题（囊胚率5.3%）；去透明带胚胎可以通过低温冷冻的方法进行保存（解冻存活率24%）。本项研究证实，徒手克隆的技术路线可行，该方法可以避免对部分昂贵仪器的依赖和简化操作程序，可望对体细胞克隆动物技术推广有一定促进作用。。