异黄酮具有重要的生理功能和应用价值,在大豆中含量最高。MYB 转录因子参与类黄酮代谢,探明其调控机制有利于人为提高大豆异黄酮含量。本课题在克隆了2个新的能显著提高类黄酮含量的MYB转录因子的基础上,欲进一步探明MYB转录因子对大豆异黄酮合成的调控机制。应用QPCR技术分析目的基因的组织表达特性与异黄酮含量的相关性,初步探明目的基因对大豆异黄酮合成的调控方向;采用凝胶阻滞法分析与MYB蛋白特异结合的顺式作用元件;用报告载体与效应载体共转化烟草叶片,根据其瞬时表达探明能被目的基因激活的大豆异黄酮合成关键酶;分析转目的基因T3代株系中大豆异黄酮合成关键酶基因的表达特性及与其异黄酮含量的相关性,探明目的基因对异黄酮合成的调控;应用酵母双杂交技术筛选与MYB转录因子基因的互作蛋白,研究相关蛋白互作时对大豆异黄酮的调控。最终探明MYB转录因子基因对异黄酮合成的调控机理,同时获得高异黄酮转基因大豆株系。
英文主题词Soybean;Transcriptional regulation;Isoflavones;Expression levels;