白内障是最常见的致盲原因之一,特征是晶状体混浊,深入研究晶状体混浊的调控机制,可为探索防治白内障新途径提供依据。前期研究表明,betaB2晶体蛋白的适度表达是维持晶状体功能的重要因素之一;miR-204可能调控betaB2晶体蛋白的表达。本课题拟在前期研究基础上,从miR-204对betaB2的表达调控入手,研究晶状体混浊进展的调控机制。首先利用生物信息学、染色质免疫沉淀、基因克隆等手段,研究miR-204的靶基因及其转录因子依赖性,明确miR-204对晶状体上皮细胞中betaB2表达以及细胞生物学功能的调控作用;进一步在动物模型上,通过注射腺病毒miR-204前体和抑制体,通过上调和抑制betaB2的表达,研究其对白内障发生、发展病程的体内调控作用。本研究可阐明betaB2晶体蛋白表达的miRNA调控机制,不仅具有学术意义,而且具有潜在的应用前景和社会效益。
白内障是最常见的致盲原因之一,是严重影响人类健康的常见病、多发病。由老化所引起的老年性白内障占有绝大部分的比例。miRNA在细胞的生长发育、增殖、分化、代谢和凋亡等生理过程中起重要作用。本课题组阐明miR-204和miR-326在人晶状体上皮细胞中的的功能和可能的分子机制。实时荧光定量PCR证明miR-204和miR-326在betaB2基因敲除小鼠(KO)中的表达量与野生型小鼠(WT)相比下调明显,提示miR-204和miR-326可能通过某种途径调控betaB2蛋白的表达。之后,经双荧光素酶报告基因实验证实miR – 204的下游靶基因为wnt4,miR - 326下游靶基因为FGF1。且miR – 204通过抑制wnt4从而抑制wnt4/β-catenin通路,最终抑制betaB2晶体蛋白的表达;而miR – 326则是通过抑制FGF1的表达而抑制betaB2晶体蛋白的表达。此外,白内障模型鼠的研究也支持上述结论。综上所述,通过抑制体内miR – 204、miR – 326的表达,分别上调wnt4与FGF1的表达量,最终上调betaB2蛋白量,为白内障的进一步研究提供借鉴性思路,并为白内障的预防和进程延缓提供新的干预靶点和治疗途径。