中文摘要：

我们前期研究发现，Cripto-1在鼻咽中表达上调，并与其侵袭与转移密切相关。RNAi沉默及过表达实验结果显示Cripto-1显著促进了鼻咽癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭。进一步通过2D-DIGE的蛋白组学方法分析，发现肿瘤相关蛋白DJ-1和14-3-3γ是受Cripto-1调节的靶蛋白。文献报道，DJ-1和14-3-3γ都可促进MAPK和PI3K/Akt信号通路的活化，而Cripto-1在肿瘤细胞中也被认为是通过上述2条信号通路发挥癌基因样的作用。本课题拟通过检测鼻咽癌中Cripto-1和DJ-1、14-3-3γ在活化MAPK和PI3K/Akt 信号通路中的相互关系来阐明Cripto-1在鼻咽癌发生发展中的作用机制，同时体外观察DJ-1和14-3-3γ对鼻咽癌细胞生物学特性的影响，探讨它们与鼻咽癌的关系。

结论摘要：

我们前期研究发现，Cripto-1（CR1）在鼻咽癌中表达上调，并与其侵袭与转移密切相关。进一步分析发现DJ-1和1433G是CR1下游调节的靶蛋白。DJ-1和1433G都可促进PI3K-Akt 和 MAPK信号通路的活化，而CR1在肿瘤细胞中也被认为是通过上述2条信号通路发挥癌基因样的作用。本课题拟通过检测鼻咽癌中CR1和DJ-1、1433G在活化PI3K-Akt 和 MAPK信号通路中的相互关系来阐明CR1在鼻咽癌发生发展中的作用机制，探讨它们与鼻咽癌的关系。 本课题实验结果表明相对于永生化鼻咽上皮细胞NP69，鼻咽癌细胞株中DJ-1和1433G表达水平均上调；而在肿瘤细胞株间，其表达在高分化鳞状细胞癌细胞系CNE1中相对最低，在低分化CNE2及C666-1细胞中相对较高。免疫组化结果表明鼻咽慢性炎组织中DJ-1和1433G均呈阴性表达，肿瘤组织中两者均阳性表达，与慢性炎组织比较均有统计学差异。进一步临床病理分析结果提示DJ-1、1433G阳性表达者多为临床末期。表明鼻咽癌中DJ-1、1433G表达增高，其表达与肿瘤的转移及演进相关。 在CNE1中，过表达CR1后，DJ-1和1433G表达也相应提高，并且PI3K、MEK1和ERK蛋白表达水平相应增强，Akt水平略有下降，但它们的磷酸化水平均无显著改变。Ras表达也上调，提示CR1可能激活Ras-Raf-MAPK信号通路。但PTEN蛋白水平下调，文献报道，DJ-1蛋白通过抑制PTEN表达，促进PI3K-Akt通路的活化。我们的实验数据进一步证实，CR1在鼻咽癌中发挥作用时，可能涉及到PI3K-Akt和MAPK信号通路的活化，而且在这一过程中DJ-1和1433G蛋白都有可能是必需的协同蛋白，但这种活化可能是瞬时作用。 在过表达DJ-1、1433G后，CNE1的生长速率增加，划痕实验及侵袭试验结果表明RNAi抑制DJ-1、1433G表达后，细胞运动及侵袭能力受到抑制。但免疫共沉淀结果并未发现CR1与DJ-1和1433G并不存在直接相互作用。 本课题揭示了在鼻咽癌中，CR1是在DJ-1和1433G的协同下，通过调节PI3K-Akt和MAPK信号途径促进肿瘤发生发展；但 CR1与DJ-1和1433G并不存在直接相互作用；DJ-1和1433G可以促进鼻咽癌细胞系生长、侵袭、转移及成瘤。