中文摘要：

项目研究建立了高效的慢病毒介导转基因小鼠制备技术体系，并系统分析了慢病毒介导的转基因表达及其甲基化状态在转基因小鼠长期传代中的变化，发现高表达的慢病毒介导的转基因拷贝其表达水平与甲基化水平在连续7代的世代传递过程中保持相对稳定。依据3A亚家族P450酶基因的保守序列，设计了针对3A亚家族P450酶基因全部成员、且与人3A亚家族P450酶基因同源性低的shRNA分子，并构建了基于人miR30的shRNA分子慢病毒表达载体。利用针对小鼠体内表达量最高、代谢活性最强的P450酶基因- - CYP3A11的miR-shRNA慢病毒表达载体，研制了CYP3A11基因knock-down小鼠模型。通过定量Real-time PCR检测表明，knock-down小鼠CYP3A11基因的表达量比对照最高降低约80%。代谢实验表明，knock-down小鼠肝脏微粒体对3A亚家族P450酶的典型代谢底物睾酮的代谢活性比对照组降低约80%，与基因表达的降低幅度相当。研制了人CYP2D6人源化转基因小鼠，为在特异性敲低CYP3A基因表达的前提下建立代谢谱更广、适用范围更大的P450酶人源化转基因小鼠奠定了基础。