中文摘要：

慢性肝损伤时肝脏局部"微环境"使组织病理性修复，其特征是细胞外基质（ECM）过度沉积与肝细胞增殖不良。目前慢性肝损伤时组织修复微环境调控的机制不明。本项目结合脯氨酰寡肽酶（POP）参与肝再生的背景，在我们新近发现POP功能抑制导致肝内源性AcSDKP不足致使促ECM沉积微环境形成的研究基础上，提出"POP调节慢性肝损伤时肝内局部微环境和双重与协同调控损伤修复"的假说，并将以大鼠四氯化碳和/或胆总管结扎模型为研究对象，结合细胞学实验，利用基因过表达和基因沉默技术，观察POP对慢性肝损伤时肝内组织修复微环境的影响，对修复过程的双重（ECM沉积与肝细胞增殖）与协同调控作用，和促进生理性修复抑制病理性重构的作用和机制。目的在于明确POP在慢性肝损伤时肝修复中的关键作用，探索减轻或逆转慢性肝损伤病理性重构、恢复生理性修复的策略，为药物研发提供新的思路和参考。

结论摘要：

本项目研究脯氨酰寡肽酶（POP）在调控慢性肝损伤时肝内局部微环境和双重与协同调控损伤修复中的作用与机制。构建POP慢病毒载体并实现大鼠肝脏中表达POP蛋白。硫代乙醇胺（TAA）肝纤维化大鼠POP蛋白较对照组降低，POP过表达组肝纤维化改善，羟脯氨酸（383.52±43.49μg/g）均低于空病毒组（498.32±90.87）μg/g，α-SMA蛋白降低40%，ALT降低70%，MCP-1降低60%，TGF-β和Smad2/3蛋白降低40%~50%，CD68阳性细胞数（21±13.45）/HP明显减少；外源性AcSDKP抑制胆总管结扎大鼠肝纤维化，α-SMA和TGF-β1下调；携POP慢病毒感染HSC-T6，POP、Smad7、PPAR-γ蛋白表达升高，MCP-1及α-SMA下降，细胞内Ac-SDKP升高；S17092抑制POP活性后，Smad7、PPAR-γ蛋白下降而α-SMA及MCP-1升高，细胞内Ac-SDKP下降；FAM-Aca-SDKP与HSC-T6共孵育后，细胞表面现显著绿色荧光，流式细胞术显示在FAM-Aca-SDKP浓度0～50μM时，荧光阳性细胞率从0%上升至12%，该反应与Ac-SDKP竟争抑制；诱导L02脂肪变时，POP蛋白较对照组升高1倍，而S17092在10-50ug/ml 显著抑制L02增殖但不影响凋亡；造模24h细胞内TG较正常组升高4倍，FASN、PPARγ及SREBP-1c基因上调，给予S17092（5-10ug/ml）处理，TG较模型组下降18%~40%，成脂基因表达抑制；以AcSDKP (0-100μM)处理RAW264.7细胞24-48h不影响细胞增殖，但AcSDKP（10nM）抑制由LPS引起的RAW264.7细胞吞噬活性减少趋化能力。因此，POP肝内过表达抑制大鼠TAA肝纤维化，伴肝内MCP-1等炎症因子和CD68+细胞数下调及TGF-β-Smads通路抑制；AcSDKP能预防BDL大鼠肝纤维化，POP通过调控Ac-SDKP生成和TGF-β-Smad影响HSC，发挥抗炎抗纤维化作用，而AcSDKP可结合于HSC表面；L02脂肪变伴细胞内POP基因上调，POP抑制剂致成脂基因下调和脂肪变缓解；POP-AcSDKP轴抑制小鼠Raw264.7巨噬细胞促炎表型。