中文摘要：

乳头瘤病毒诱导肿瘤发生与其对凋亡的调控有密切关系，我们曾发现乳头瘤病毒E6基因可以促进正常角质生成细胞在DNA损伤时凋亡的发生，而cdc2是其中的关键调控分子，在进一步研究其信号通路时，发现由于E6和cdc2的上下游基因调控相当复杂，传统单基因干预模式工作量浩大，无法满足研究的需要，而基因组范围内的高通量筛选则有解决此问题的可能。因此我们拟利用RNA干扰原理构建随机小干扰RNA逆转录病毒库，感染表达E6的角质生成细胞，从功能着手筛选能够特异性阻断E6促凋亡作用的小干扰RNA分子，利用生物信息学手段逆向分析推出相应参与调控分子，进行信号调控模式图的重建及验证，从而达到对E6的促凋亡作用进行全信号通路筛选的目的。通过这种以细胞功能表型为基础的高通量筛选模式，阐明E6-cdc2-凋亡发生的分子机制，对乳头瘤病毒的致病机制进行有益的探索。

结论摘要：

乳头瘤病毒诱导肿瘤发生与其对凋亡的调控有密切关系，我们曾发现乳头瘤病毒E6 基因可以促进正常角质生成细胞在DNA 损伤时凋亡的发生，利用RNA 干扰原理我们构建了库容达10^6的随机小干扰RNA 逆转录病毒库，通过感染Jurkat细胞，并用Fas配体处理，发现了一些重要的介导Fas凋亡途径的分子，其中包括FADD、Bax等，提示我们建立的siRNA库可用于进一步的筛选。利用逆转录病毒感染表达E6 的角质生成细胞，进行足叶乙甙处理，扩增存活克隆，基因组PCR鉴定，获得了120条能够特异性阻断E6 促凋亡作用的小干扰RNA 分子，利用生物信息学手段逆向分析出46个重要的调控分子,其中包括Cdc2、SMAC/DIABLO、FADD等，提示随机小干扰RNA库策略可以用于以表型为基础的筛选。通过这种以细胞功能表型为基础的高通量筛选模式，阐明E6-cdc2-凋亡发生的分子机制，为探索乳头瘤病毒的致病机制进行有益的探索。