克隆鉴定新的细胞周期蛋白CyclinY,利用双杂交和免疫共沉淀技术,研究CyclinY与三种蛋白激酶PFTAIRE1,PCTAIRE1,Akt1相互作用机理,确定CyclinY-激酶复合体在信号转导途径中的作用位置。利用GFP融合表达,抗体荧光标记与亚细胞分级分离技术,研究CyclinY以及其结合的三个蛋白激酶在细胞内的定位情况,分析CyclinY与对应的蛋白激酶在不同亚细胞部位发挥的功能。利用分
分离鉴定了人CyclinY基因和PFTAIRE1基因,CyclinY基因的GenBank收录号为AY504868,PFTAIRE1的GenBank收录号为AF119833。分别以全长Cyclin Y和hPFTAIRE1作为诱饵,筛选人脑LexA酵母双杂交文库,得到多个相互作用的蛋白。免疫共沉淀实验证明CyclinY能与PFTAIRE1,PCTAIRE1,Akt1三种蛋白激酶相互作用,而PFTAIRE1能够与14-3-3?,14-3-3?,14-3-3?,14-3-3?,KIAA0202,PLZF和Cyclin Y相互作用。CyclinY能与PFTAIRE1相互作用并共定位于细胞质,高表达CyclinY和PFTAIRE1能促进细胞进入S期,而用RNAi阻断它们的转录,则使细胞停滞在G1期。Cyclin Y存在三个转录本,两个大的转录本呈少量组成性表达,小转录本在不同组织的表达量各不相同。Cyclin Y定位于细胞膜和细胞质,这种定位方式与其N端脂肪酸化修饰相关,当脂肪酸化修饰被破坏时,Cyclin Y完全滞留在细胞质中。