根据微生态学和广义营养学原理,采用体内与体外、传统与现代相结合的方法,运用先进的"16S rDNA(rRNA)"技术、"PCR-DGGE " 技术及传统培养技术,探讨不同水平及组合NDOs对锦江黄牛瘤胃微生物生长、发酵及组成影响。(1)不同水平及组合NDOs对瘤胃微生物DMNP、MOEFF及模型的影响;(2)不同水平及组合NDOs对瘤胃微生物DGGE图谱带数(Ni)、总带数(N)及丰度(P)影响(3)不同水平及组合NDOs对瘤胃微生物组成(总数及比例)的影响 (4)不同水平及组合NDOs对瘤胃发酵参数(MCP、VFA、pH、NH3-N)及内容物酶活的影响通过研究,将阐明NDOs对锦江黄牛瘤胃微生物区系结构、多样性、种群动态、生长速率、生长模型及瘤胃发酵类型、特征、参数、发酵活力影响,得出锦江黄牛NDOs的适宜添加品种、水平及组合,为NDOs在锦江黄牛及其他反刍动物中应用提供依据。
non-digestible oligosaccharide;suitable combination;rumen microbes;rumen fermentation;
采用体外批次培养、瘘管牛及PCR-DGGE 技术,探讨不同水平及组合NDOs对锦江黄牛瘤胃微生物生长、发酵及组成影响。(一)不同水平及组合NDOs 对锦江黄牛瘤胃发酵的影响首先,采用体外批次培养法。结果表明功能性寡糖可以显著增加瘤胃产气量、BCP浓度、NH3-N利用率和NDF降解率,总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度显著增加,乙酸/丙酸比值显著降低。综合分析, 0.8%甘露寡糖+1.0%果寡糖+0.8%大豆寡糖(简称GT1)和0.8%甘露寡糖+1.2%果寡糖+1.0%大豆寡糖(简称GT2)为较好理想组合。 然后,采用自身对照的设计方法,研究了GTI和GT2对锦江黄牛瘤胃瘤胃发酵功能的影响。结果表明2个组合寡糖对瘤胃液的pH值影响不显著(P>0.05),但均能提高瘤胃液中NH3-N浓度和VFA浓度,降低瘤胃液中MCP浓度,以添加GT2(0.8%甘露寡糖+1.2%果寡糖+1.0%大豆寡糖)效果较好。(二)不同品种、水平NDOs 对锦江黄牛瘤胃微生物生长效率的影响采用体外培养方法。结果表明不同水平的甘露寡糖、果寡糖及大豆寡糖,每日微生物氮产量(DMNP)有提高的趋势,但差异不显著(P>0.05)。添加1.17%甘露寡糖, DMNP为59.72g, MOEFF最大;添加1.03%大豆寡糖,DMNP为59.50 g,MOEFF最大。寡糖的适宜添加水平为1.00%~1.20%。(三)不同组合NDOs 对瘤胃固相、液相微生物多样性影响采用PCR-DGGE技术。结果表明(1)固相微生物PCR-DGGE图谱条带数影响不明显;(2)液相微生物PCR-DGGE图谱条带数明显增加,产生了12个特异性条带。其中,经测序分析,2株为产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes),另外10株在基因库中为未培养菌。 (四) 不同组合对锦江黄牛瘤胃内容物酶活的影响采用自身对照的方法,结果表明添加寡糖组合能提高纤维素酶、木聚糖酶和总脱氢酶活性,未见提高瘤胃液中蛋白酶活性。(五)功能性寡糖组合对稻草在锦江黄牛瘤胃降解率的影响采用尼龙袋法,结果表明添加功能性寡糖组合GT1和GT2期均能够极显著提高DM、OM、NDF、ADF降解率(P<0.01),GT1和GT2之间差异不显著(P>0.05);对CP降解率无显著影响(P>0.05)。