位置:成果数据库 > 期刊 > 期刊详情页
抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析
  • ISSN号:1000-8861
  • 期刊名称:《免疫学杂志》
  • 时间:0
  • 分类:R392.11[医药卫生—免疫学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]重庆理工大学药学与生物工程学院,400054, [2]重庆市垫江县中医院检验科,408300, [3]北欧生物科技北京有限公司,102206
  • 相关基金:国家自然科学基金(30571714,60873103); 重庆市科委自然基金(2008BB5331,2009BB7231); 重庆市卫生局科研项目(2012-2-383)
中文摘要:

目的制备抗3-硝基酪氨酸(3-NT)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法用化学合成方法将3-NT与OVA用戊二醛偶联合成的人工抗原3硝基酪氨酸-戊二醛-鸡卵白蛋白(3NT-G-OVA)作为免疫原,皮下注射免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,扩大培养并对抗体进行免疫学鉴定与分析。结果获得1株稳定分泌抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗亚型为Ig G2a;纯化后的抗体效价为1∶(6.14×106);单抗亲和力常数为7.81×107(L·mol^-1);Western blot检测证明该单抗与含有3-硝基酪氨酸的蛋白能特异地结合。结论制备了1株具有较高免疫学活性和特异性的抗3-NT单克隆抗体,并可用于Western blot检测病人样本中的蛋白硝基化水平。

英文摘要:

This study aimed to prepare monoclonal antibodies(m Ab) against 3-nitrotyrosine(3-NT) and analyze its immunological traits. With synthesized 3NT-G-OVA as antigen, Balb/c mice were immunized and the splenocytes of the immunized mice were fused with the SP2/0 myeloma cells by hybridoma technique. Results showed that a hybridoma cell line 2F6 was established, which could stably secret monoclonal antibody against 3-NT. The secreted antibody was analyzed for titer, isotype, affinity and specificity. The isotype of the mc Ab was Ig G2a/κ, the indirect ELISA showed the titers of m Ab was 1∶(6.14×106), and the affinity constant was 7.81×107(L·mol^-1). Furthermore, indirect ELISA/Western blot indicated that the mc Ab could recognize the peptide/protein containing 3-NT. From all the results, we presume that the mc Ab prepared in this paper has high immune-activity and specificity, and might be useful for diagnosis of diseases related to 3-nitrotyrosine.

同期刊论文项目
同项目期刊论文
期刊信息
  • 《免疫学杂志》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:第三军医大学
  • 主办单位:第三军医大学 中国免疫学会
  • 主编:吴玉章
  • 地址:重庆市沙坪坝高滩岩
  • 邮编:400038
  • 邮箱:richard@mail.tmmu.com.cn
  • 电话:023-68752237
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-8861
  • 国内统一刊号:ISSN:51-1332/R
  • 邮发代号:78-32
  • 获奖情况:
  • 中国科协优秀科技期刊三等奖,全军优秀医学期刊奖,重庆市优秀期刊一等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:13273