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兔抗人β2糖蛋白Ⅰ多克隆抗体的制备与鉴定
  • ISSN号:1001-764X
  • 期刊名称:《临床检验杂志》
  • 时间:0
  • 分类:Q813[生物学—生物工程]
  • 作者机构:[1]江苏大学基础医学与医学技术学院,江苏镇江212013, [2]浙江省中医院检测中心,杭州310006
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30370602,30670907),浙江省自然科学基金资助项目(Y206830)及浙江省教育厅基金资助项
中文摘要:

目的制备兔抗人β2糖蛋白Ⅰ多克隆抗体,并鉴定抗体的特异性及功能活性。方法以纯化的人血浆p2糖蛋白Ⅰ(β2-GPI)免疫新西兰大白兔,获得抗血清;利用ProteinA及β2-GPI亲和层析柱纯化血清中总IgG和抗β2-GPI多克隆抗体;用免疫双向扩散试验(IDD)、ELISA和western-blot等方法鉴定抗体。结果IDD及ELISA鉴定抗体效价分别达到16和1×10^5;western-blot显示纯化的总IsG和抗β2-GPI抗体与β2-GPI蛋白均有特异反应条带;且抗体与β2-GPI复合物能够刺激单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)活性。结论成功获得并纯化兔抗人β2-GPI多克隆抗体,为进一步研究β2-GPI/抗β2-GPI复合物在抗磷脂抗体综合征血栓形成机制中的作用建立了基础。

英文摘要:

Objective To prepare rabbit polyclonal antibody against human β2-GPI and to characterize the specificity and biological functions of the antibocly. Methods A rabbit was immunized with purified-human β2-GPI- The serum whole IgG and anti-β2-GPI antibody were purified by protein A and β2-GPI affinity chromatography respectively. The specificity of the antibody was determined by IDD, ELISA, and Western blotting ( WB), and the function of the antibody was analyzed. Results The reactive titers of the anti-serum and the whole IgG reached to 1:16 and 1:100 000 with IDD and ELISA respectively. Both the whole IgG and anti-β2-GPI antibody reacted with β2-GPI in WB. The complex of the antibody and β2-GPI induced the monocytic cell line THP-1 to express tissue factor. Conclusions The polyclonal antibody against human β2-GPI has been prepared in the present study, which provides an efficient reagent for studying mechanisms of the thrombosis associated with antiphospholipid syndrome.

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期刊信息
  • 《临床检验杂志》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:江苏省卫生和计划生育委员会
  • 主办单位:江苏省医学会
  • 主编:许文荣
  • 地址:南京市中央路42号
  • 邮编:210008
  • 邮箱:editor@lcjyzz.com
  • 电话:025-83620683
  • 国际标准刊号:ISSN:1001-764X
  • 国内统一刊号:ISSN:32-1204/R
  • 邮发代号:28-104
  • 获奖情况:
  • 国家科技部中国科技论文统计源期刊,中国科学引文数据库医学类核心期刊,中国期刊方阵“双效”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:21982