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龙眼胚性愈伤组织ACC氧化酶基因的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析
  • ISSN号:0578-1752
  • 期刊名称:《中国农业科学》
  • 时间:0
  • 分类:S662.103.5[农业科学—果树学;农业科学—园艺学]
  • 作者机构:[1]福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州350002, [2]福建省亚热带植物研究所,福建厦门361006
  • 相关基金:国家科技支撑计划项目(2007BAD07B01); 国家自然科学基金项目(30471204); 福建省重大科技平台建设项目(2008N2001)
中文摘要:

【目的】分离克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织乙烯合成关键酶ACO(1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase)基因,并分析该基因在龙眼体细胞胚胎(以下简称龙眼体胚)发生过程中的表达情况。【方法】采用RT-PCR结合RACE法,获得龙眼胚性愈伤组织ACO基因的cDNA全长序列和DNA序列,运用生物信息学方法对序列进行分析,并通过实时荧光定量PCR(q-PCR)法研究该基因在龙眼体胚发生过程中的表达【。结果】克隆得到龙眼胚性愈伤组织ACO基因1315bp的cDNA全长序列(GenBank登录号为FJ534854),该cDNA的开放阅读框推定的氨基酸序列(含315个氨基酸)与其它植物ACO具有86%-47%同源性,包含了5'非编码区为86bp,3'非编码区为281bp,3'poly(A)尾长13bp;该基因的DNA序列(GenBank登录号为GU123929)长为1660bp,包含3个内含子,内含子的剪切位点均符合真核生物"GT-AG"规则;该基因在龙眼体胚各阶段均有表达,整个变化趋势呈字母"M"状。【结论】确定所获得的序列是龙眼胚性愈伤组织ACO基因的cDNA序列和DNA全长序列;该基因在不完全胚性紧实结构和心形胚的表达量为两个峰值。

英文摘要:

Objective In this study,the 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase gene(ACO) was cloned from embryogenic calli of Longan(Dimocarpus longan Lour.).And the expression of ACO was determined during Longan somatic embryogenesis.Method The RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction) with RACE(rapid amplification of cDNA ends) method were used to clone the complete cDNA sequence and DNA sequence of ACO from embryogenic calli of Longan.And bioinformatics method was used to analyze sequences obtained and putative amino acid sequence.Then qRT-PCR(real-time reverse transcription PCR) method was used to determine the cDNA transcription level of this gene.Result The full length ACC oxidase cDNA from Dimocarpus longan embryogenic callus,about 1 315 bp[including a 13 bp poly(A) tail],consisted of an open reading frame of 948 bp,and 5' and 3' utranslated regions of 86 bp and 281 bp,respectively.The sequence had been submitted to the DDBJ /EMBL/GenBank database,the accession number was AY521566.The putative protein has 315 amino acids,and the identity with the other polypeptides varied between 86%-47%.Its DNA sequence(the accession number is GU123929) was 1660 bp,and the splice sites of three introns contained were obeyed to the "GT-AG" rule.ACO from embryogenic calli of Longan expressed in the different stages during somatic embryogenesis.And it showed approximately a "M" curve.Conclusion It is inferred that the full length cDNA and DNA sequence from embryogenic calli of Longan are obtained.The peak cDNA transcription level of Longan.ACO gene occurred at the incomplete compact pro-embryogenic culture stage and the heart embryo stage.

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期刊信息
  • 《中国农业科学》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国农业部
  • 主办单位:中国农业科学院 中国农学会
  • 主编:万建民
  • 地址:北京中关村南大街12号中国农业科学院图书馆楼4101-4103室
  • 邮编:100081
  • 邮箱:zgnykx@caas.cn
  • 电话:010-82109808 82106279
  • 国际标准刊号:ISSN:0578-1752
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1328/S
  • 邮发代号:2-138
  • 获奖情况:
  • 中国期刊方阵“双高”期刊,第三届中国出版政府奖提名奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国食品科技文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:85620