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加强辅酶循环再生实现不对称合成(S)-1-苯基-1,2-乙二醇
  • ISSN号:0490-6756
  • 期刊名称:《四川大学学报:自然科学版》
  • 时间:0
  • 分类:O621.3[理学—有机化学;理学—化学]
  • 作者机构:[1]江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡214036
  • 相关基金:国家自然科学基金(20376031);973项目(2003CB716000);新世纪人才支持计划
中文摘要:

以β-羟基苯乙酮为底物,利用羰基还原酶不对称合成(S)-1-苯基-1,2-乙二醇(PED)过程中,葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化NADPH再生反应与还原反应形成耦联,合成(S)-PED的浓度分别达到0.78 g·L^-1和0.75 g·L^-1,对映体过量值(e.e.%)分别为91.84%和63.96%;连续分批还原反应后其总转化数(TTN)为26和58;经硫酸铵盐析、离子交换层析DEAE Sepharose、苯基疏水层析Phenyl Sepharose和亲和层析Blue Sepharose后得到电泳纯的羰基还原酶,比活为99.9 U/mg,亚基分子量为29,800;纯酶耦联葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶合成(S)-PED的浓度达到了1.04 g·L^-1和1.19 g·L^-1,证明了辅酶循环再生的存在.同时发现在利用胞内酶自耦联再生NADPH过程中,以乙醇作为辅助底物时效果最好.

英文摘要:

In the process of asymmetric synthesis of (S)-1-phenyl-1, 2-ethanediol from β-hydroxyacetophenone, glucose dehydrogenase and glucose-6-phosphate clehydrogenase were used to regenerate NADPH coupled with reduction reaction. The concentration of ( S )-PED reached 0.78 g·L^-1 and 0.75 g·L^-1 respectively, enatiomeric excess (e. e. % ) reached 91.84% and 63.96%. Total turnover number were 26 and 58 in the continuous batch reduction reactions. Carbonyl reductase was purified to electrophoretic homogeneity by ammonium sulfate precipitation, DEAE Sepharose chromatography, Phenyl-Sepharose chromatography and Blue Sepharose chromatography. Specific enzyme activity was 99.9U and the molecular weight of the subunit by SDS-PAGE was 29,800. The concentration of (S)-PED were 1.04 g·L^-1and 1.19 g·L^-1 when purified carbonyl reductase was coupled to glucose dehydrogenase and glucose-6-phosphate dehydrogenase to synthesize (S)-PED. It was demonstrated that the cofactor recycle exists in the purified enzyme. It was found that in the synthesis of ( S)-PED coupled with other enzyme in cell that can regenerate NADPH, it makes the best effect when alcohol is added as the cosubstrate.

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期刊信息
  • 《四川大学学报:自然科学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:国家教育部
  • 主办单位:四川大学
  • 主编:刘应明
  • 地址:成都九眼桥望江路29号
  • 邮编:610064
  • 邮箱:
  • 电话:028-85410393 85412393
  • 国际标准刊号:ISSN:0490-6756
  • 国内统一刊号:ISSN:51-1595/N
  • 邮发代号:62-127
  • 获奖情况:
  • 国家“双效”期刊,四川省十佳科技期刊,教育部全国高校优秀学报二等奖(1995,1999),四川省科技优秀期刊一等奖(1996,2000)
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),美国数学评论(网络版),德国数学文摘,美国生物科学数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:10542