将自然界原生动物细胞在一定条件下形成的休眠现象,引入人类恶性肿瘤的研究中,建立了人胃癌裸鼠移植瘤细胞休眠模型,重点观察细胞休眠的自然发生过程及健脾益气方药对其调节作用;同时观察手术、化疗对细胞休眠的影响;研究肿瘤细胞生长-休眠-转移之间的互动关系及相关免疫机制。通过对胃癌细胞增殖抑制、细胞周期、凋亡等检测,对转录基因表达及蛋白修饰过程的检测,揭示以调节胃癌细胞休眠为契机进而抑制肿瘤转移的免疫学机制,阐明健脾益气方药及手术、化疗在调节肿瘤细胞休眠中的作用,为恶性肿瘤转移的治疗提供新靶点,推动胃癌侵袭转移研究的进程。
为了探讨健脾益气方药调节胃癌细胞休眠的作用及可能的作用机制,我们从细胞休眠与胃癌复发转移的相互关系;健脾益气方药调节胃癌细胞休眠作用;中药调节休眠基因对免疫功能影响三个方面进行了研究。首先克隆了休眠基因restin,建立了稳定表达GFP-restin基因的胃癌BGC-803细胞系;进行诱导表达restin基因促进BJC-803细胞休眠实验。在此基础上,建立了人胃癌裸鼠移植瘤模型,荧光显微镜下观察细胞休眠自然发生过程及中药对其调节作用;同时观察手术、化疗对休眠过程的影响及表达restin基因对肿瘤抑制作用;分析细胞休眠与增殖、凋亡相关性。结果发现,中药对胃癌具有明显增殖抑制作用,化疗组、基因组、中药组抑瘤率分别为55.75%、13.27%、40.71%;流式细胞仪检测细胞周期发现,中药组G0/G1期细胞数百分比明显升高,表现为G0/G1期细胞阻滞趋势,呈剂量、时间依赖效应;肿瘤组织病理检测,可见癌细胞大片坏死,细胞结构不清,核分裂相易见。结论健脾益气方药具有调节胃癌细胞休眠作用,其作用可能与诱导restin基因表达水平及影响G0/G1期细胞组滞有关。