本项目研究内容是以海参为研究对象,采用生化分离技术,通过SDS-PAGE、IEF、peptide mapping等技术鉴定糖结合型胶原蛋白类型。采用海参中多种自溶蛋白酶和商业酶对胶原蛋白进行降解制备不同的活性多肽,通过柱色谱和高效液相色谱进行分离纯化,测序后确定结构并以抗氧化体系确定糖结合型活性多肽的构效关系,研究其抗氧化特性的机理。在此基础上再进行促智实验,最终确定海参中活性成分的特性。本研究课题意义在于1)对糖结合型海参胶原蛋白的结构特性和营养特性的研究丰富了胶原蛋白的研究领域,填补了国内空白。2)为建立评价海参的品质与营养价值的统一标准,以及海参在中药和食品的加工提供理论依据。3)糖结合型海参胶原多肽的清除自由基、抗氧化及增智等生物学活性的深入研究,开发了海参新的食(药)用功效,推动了保健功能食品行业的进展,同时促进海参产业的发展。
海参具有较高的营养价值和药学价值。其中,与抗氧化相关的活性在众多的功效中较为突出。海参体壁的主要活性成分为胶原蛋白、酸性粘多糖和海参皂苷。国内外对海参的活性研究主要集中于粘多糖和海参皂苷等。60%以上海参蛋白质是糖结合型胶原蛋白,糖结合型海参胶原肽的抗氧化活性研究在国内外未见报道。项目的主要研究内容为以海参研究对象,分离纯化并鉴定糖结合型胶原蛋白类型, 制备具有较高抗氧化活性的糖结合型胶原蛋白多肽,研究其抗氧化活性。取得的重要结果有首次从海参消化道中纯化出超强碱性蛋白酶,其最适pH为13.5,分子量为20.6 kDa;从海参多糖中纯化出海参硫酸软骨素和岩藻聚糖硫酸酯,利用柱前衍生HPLC法完成了海参多糖中氨基糖、糖醛酸和中性单糖的同时测定,建立了海参多糖指纹图谱;首次对P. graeffei的皂苷类成分进行了分离、纯化和结构鉴定。共得到8个具有两种母核结构的海参烷型三萜皂苷;确定了日本刺参糖结合型胶原蛋白的分子组成为(a1)3。制备了具有较高抗氧化活性的糖结合型胶原蛋白肽,并对其抗氧化相关活性和作用机制进行了研究。本项目的研究结果为建立海参品质与营养价值的统一标准提供了理论依据.