中文摘要：

端粒酶激活是细胞永生化、癌变的基础，是近年来肿瘤基因治疗的理想靶点。研究证实癌细胞端粒酶的蛋白质亚单位hTERT是调控端粒酶活性的开关。首先，本课题利用肝癌细胞hTERT开启及端粒酶高表达的特性，克隆肝癌细胞hTERT促进子，然后在此特异促进子下游插入自杀基因，利用前者高表达的特性，使hTERT驱动的自杀基因高表达从而引起肿瘤细胞自杀死亡，周围的癌细胞吞噬死亡癌细胞的碎片而通过旁观者效应大量死亡；第二，基因载体是基因治疗成败的关键，本研究将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞杂交，产生肝癌特异性单抗hAb-AF-20，并以此为载体，使之与自杀基因质粒藕联，在裸鼠水平观察hAb-AF-20-hTERT－tk/GCV 对肝癌的治疗作用。本研究目的在于研制特异靶向肝癌细胞的基因治疗载体和高效、低毒、不引起机体免疫反应的抗肝癌基因治疗药物并研究其分子作用机制，为肝癌基因治疗提供实验依据。

结论摘要：

目的观察治疗质粒AF-pGL3-hTERT-TK 对原发性肝癌细胞系HepG2生物学特性的影响。方法构建端粒酶启动子hTERT驱动的自杀基因TK的表达质粒pGL3-hTERT-TK。将 pGL3-hTERT-TK与 AF-脂质体连结构建成治疗质粒，瞬时转染法将AF-pGL3-hTERT-TK导入肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L-02，用TUNEL和流式细胞仪技术观察治疗质粒对肝癌细胞、正常肝细胞生长和凋亡的影响。 结果: 治疗质粒AF-pGL3-hTERT-TK能通过AF识别HepG2细胞表面的特异受体ASGPR而转染肝癌细胞，转染效率为8.91%；肝癌细胞自身的端粒酶催化亚单位hTERT能驱动自杀基因TK高效表达；TK基因的产物使得无毒性更昔洛韦转化为三磷酸更昔洛韦，后者对肝癌细胞的毒性作用造成肝癌细胞大量自杀死亡及凋亡。流式细胞仪显示GCV作用4天时细胞凋亡率为64.19%。肝细胞L-02不表达ASGPR，AF-pGL3-hTERT-TK不能转染肝细胞而不影响其生长。结论AF-pGL3-hTERT-TK靶向作用于肝癌细胞使其大量凋亡，有潜在临床应用前景。