本项目以本室构建的B,Licheniformis热稳定 α-淀粉酶基因重组质粒pAmy413为材料,通过定点诱变,或引入Polylinker创造新的信号肽酶识别窗口,获得三个构建株pAmy413B,413L和413C。前2株淀粉酶产量分别为pAmy413的3%和36%,第3株则为pAmy413的2倍以上。说明信号肽的C端和成熟蛋白N端氨基酸的变化对α-淀粉酶的分泌有重要影响;荷正电氨基酸的引入可阻碍蛋白质的分泌;荷负电氨基酸的引入则促进蛋白质的分泌;碱基的突变位置也影响蛋白质的分泌;蛋白质的分泌与产量正相关。对信号肽及成熟蛋白N端mRNA及酶蛋白进行二级结构分析,从理论上探讨了影响蛋白质分泌的因素。
英文主题词B,Licheniformis;thermostable α-amylase ;protein secretion;signal peptide ;analysis of the secondary structure