中文摘要：

本课题采用离体致病性大肠杆菌致肠上皮细胞（Caco-2）损伤模型和盲肠穿孔结扎法脓毒症模型，从基因水平、细胞水平和整体水平对脓毒症肠上皮细胞紧密连接（TJ）蛋白生物学功能的变化进行深入研究，包括紧密连接蛋白表达位置、极性改变和定量分析，分子运动及构像，半衰期以及基因芯片寡核苷酸微阵列杂交技术，以及动物模型肠通透性和完整性、粪便细菌DNA指纹图谱分析及回、结肠黏膜基因组表达改变，同时采用原生菌干预以揭示其对TJ的调控作用。本课题将阐明脓毒症紧密连接蛋白变化及原生菌调控的重要特征，对改善临床肠道屏障功能及肠源性感染的救治奠定坚实的基础。

结论摘要：

本实验通过研究肠上皮细胞模型(Caco-2细胞)在侵袭性大肠杆菌（EIEC）感染后的生物学功能改变，及乳酸菌对其调控，以阐明乳酸菌对EIEC对Caco-2细胞相关基因和蛋白表达的调控。研究方法建立单层Caco-2细胞感染模型；单层上皮细胞极性检测；采用免疫金标记及电镜观察上皮细胞间TJ的位置和超微结构；测定单层细胞TER值的变化；HPLC测定甘露醇溶液的透过率间接反映单层细胞的通透性；采用细胞组化、荧光、Western blot方法观察TJ相关蛋白的分布和超微结构变化；观察细胞骨架F-actin的表达；采用基因芯片分析各实验组间基因表达的差异；采用2D电泳分析各实验组间蛋白的差异表达，并进行蛋白质质谱分析。结论EIEC感染后可引起肠道单层上皮的完整性、细胞间紧密连接结构和细胞内骨架的破坏，而乳酸菌黏附于肠上皮样细胞Caco-2后，可以抑制EIEC引起的单层细胞完整性破坏，改善紧密连接的结构变化和相关蛋白的表达分布。应用基因芯片和蛋白质质谱技术初步筛选了与乳酸菌抑制EIEC感染相关的差异表达基因和蛋白，为阐明其作用途径提供新的线索。