中文摘要：

核纤层蛋白前体A（prelamin A）C末端不能被剪切或异常剪切50个氨基酸残基均导致衰老。Prelamin A 的C末端特异识别因子Narf可能参与其剪切并与细胞衰老有关。本项目利用衰老表型细胞检测Narf在缺失lamin A和堆积了progerin或未经加工的prelamin A细胞中的表达和定位，探讨Narf的表达和定位是如何受到prelamin A／progerin/lamin A的影响。在HEK293以及瞬时表达了prelamin A的HEK293细胞中过表达外源性Narf cDNA或者用RNAi抑制内源性Narf的表达，观察是否会影响prelamin A的加工或定位，造成或拯救细胞衰老。我们还将确定Narf蛋白与prelamin A结合的区域并进行突变，观察对prelamin A无法结合Narf后的定位和对细胞衰老的影响。结果将揭示Narf在细胞衰老中的作用。

结论摘要：

prelamin A的堆积和突变均能导致细胞衰老，其特异性识别因子可能发挥着重要作用。本项目以核纤层蛋白前体的C端结合蛋白Narf为研究对象，用酵母双杂交和荧光共定位等方法证明了Narf与prelamin A的作用区域，其C端387-456aa为与prelamin A结合的非必需区；发现lamin A/prelamin A堆积或过表达细胞中Narf的表达没有受到明显影响，但在lamin A基因完全缺失细胞中表达下调；细胞中过表达Narf不影响prelamin A加工，蛋白表达量没有明显改变，但p53蛋白表达升高，同时检测了Narf过表达对细胞增殖、凋亡和衰老的影响，发现其过表达具有增加细胞衰老和凋亡的趋势。此外，我们还在研究过程中发现了GST-Narf融合蛋白在原核和真核细胞中的存在降解情况；同时实现了酵母中Narf的同源基因Nar1的敲除，证明Nar1的敲除使酵母复制性寿命缩短，在能量限制培养条件下突变酵母寿命能恢复至野生型。通过这一系列研究，证明了Narf为一个衰老相关蛋白，一定程度上揭示了Narf在细胞衰老中的作用。