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小鼠高迁移率族蛋白1cDNA克隆、原核表达与鉴定
  • ISSN号:1671-7783
  • 期刊名称:江苏大学学报(医学版)
  • 时间:0
  • 页码:97-111
  • 语言:中文
  • 分类:R392.11[医药卫生—免疫学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]江苏大学基础医学与医学技术学院检验医学研究所,江苏镇江212013
  • 相关基金:[基金项目]国家自然科学基金资助项目(30871193;30710103093);江苏省高等学校大学生实践创新训练计划;江苏大学大学生科研立项(06A080)
  • 相关项目:PTD-scurfin融合蛋白的生物学作用及其在器官移植中的应用研究
中文摘要:

目的:克隆并原核表达小鼠高迁移率族蛋白1(high mobility group box1,HMGB1)。方法:从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,应用RT-PCR获得小鼠HMGB1cDNA,经PCR扩增小鼠HMGB1基因;通过T-A克隆将该基因构建到PMD-18T载体中,测序鉴定;将该基因插入pET-28a(+)表达载体,IPTG诱导后,可表达相对分子质量约30 kDa的蛋白。蛋白质印迹鉴定表达的目的蛋白。结果:经RT-PCR扩增得到648 bp的DNA片段,序列分析显示与基因库中报道的已知序列完全一致;构建了含有HMGB1编码序列的原核表达载体,经诱导表达、蛋白质印迹鉴定,获得相对分子质量约30 kDa的融合蛋白。结论:成功克隆和表达了小鼠HMGB1基因,为HMGB1蛋白的功能试验奠定了基础。

英文摘要:

Objective: To clone and express mouse high mobility group box chromosomal proteinl (HMGB1) gene. Methods: Total RNA was extracted from mouse spleen cells, and the whole length of HMGB1 gene was obtained by RT-PCR. The HMGB1 gene was cloned into PMD-18T vector by T-A clone and sequenced. Then the gene was inserted into pET-28a ( + ) expression vector, identified by Western Blot. Results: The target DNA sequence of HMGB1 was obtained by RT-PCR which was about 648 bp length,sequencing results showed that HMGB1 gene was exactly consistent with the sequence reported in GenBank;Western Blot identified there was a protein strap about Mr. 30 000. The HMGB1 protein was successfully expressed. Conclusion: Clone and express mouse HMGB1 gene. It might provide a foundation for further study on the protein of HMGB1 function.

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期刊信息
  • 《江苏大学学报:医学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:江苏省教育厅
  • 主办单位:江苏大学
  • 主编:许化溪
  • 地址:江苏省镇江市梦溪园巷30号
  • 邮编:212003
  • 邮箱:
  • 电话:0511-84446824
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-7783
  • 国内统一刊号:ISSN:32-1669/R
  • 邮发代号:28-192
  • 获奖情况:
  • 1995年、1999年被评为江苏省优秀学报
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,中国中国科技核心期刊
  • 被引量:6001