选择参与PVR发生的主要细胞-视网膜色素上皮细胞作为研究对象,以细胞信号转导为研究手段,在细胞和分子以及基因水平上探索中药水蛭对视网膜色素上皮细胞信号转导系统的影响,以进一步阐明水蛭的作用机理,从而探寻化瘀散结法的现代物质基础,为开辟新的治疗PVR的药物奠定基础。
该项目利用细胞培养技术,在细胞,分子及基因水平上观察了水蛭渗滤液对视网膜色素上皮细胞信号转导通路的影响。研究结果表明(1) 水蛭渗滤液对凝血酶诱导的RPE细胞增殖具有抑制作用。其机理为水蛭渗滤液阻止了凝血酶与受体的结合;使细胞内游离Ca2+浓度下降;并与G蛋白信号转导通路有一定关系。(2)水蛭渗滤液对PDGF诱导的RPE生长具有一定的抑制作用,可能与PDGF竞争PDGF受体有关;水蛭渗滤液中的有效成分能降低牛RPE细胞内PTK的活性,阻断PTK介导的跨膜信号转导中的STAT3下游信号通路,推测与其能竞争性紧密结合RTK有关。(3)水蛭渗滤液使RPE细胞内P38活性明显降低,阻断了MAPK介导的信号转导通路,从而抑制了RPE细胞的增殖。(4)水蛭渗滤液能有效抑制体外培养的人RPE细胞增殖,将人RPE细胞阻抑于G0/G1期,使进入S期的细胞数减少,细胞增殖活性降低。实验中发现RPE细胞转分化现象,有待进一步研究。