根据中国野生华东葡萄白河35-1cDNA文库中获得的5个功能未知基因及1个新基因EST序列,采用RACE技术克隆获得了抗白粉病未知功能及相关新基因的cDNA全长序列,并进行了原核表达研究;分离克隆了中国野葡萄华东葡萄抗白粉病芪合成酶基因及新基因的上游调控序列;建立了抗病种质白河35-1株系及感病欧洲葡萄品种的再生体系,构建了中国野葡萄抗白粉病新基因GLOxrg的过量表达及RNA 干扰载体,以农杆菌介导法及渗透法进行了新基因GLOxrg遗传转化及瞬时表达研究;并通过Real-time PCR 分析了GLOxrg在葡萄白粉菌胁迫下的表达变化规律,亚细胞定位分析表明其表达产物主要定位于叶片细胞的细胞壁上,GLOxrg的瞬时表达分析表明,渗透处理过的叶片接种白粉病后表现为抗病,而未经渗透处理的叶片表现为感病。此外,利用欧洲葡萄无核品种与中国野葡萄大田杂交后进行胚挽救选育抗病无核葡萄154株;获得的中国野葡萄抗白粉病抑制消减文库及EST序列43条;获得中国野葡萄抗霜霉病基因的cDNA文库及EST序列254条;获得了中国野葡萄抗霜霉病的6个RAPAD标记。这些为进一步研究新基因提供了DNA依据。
英文主题词Chines wild Vitis; powdery mildew resistance;functional analysis; Prokaryotic expression; breeding